Anticuerpo policlonal de conejo Acetil-DNMT1 (K1127/K1129/K1131/K1133) (P26358) para IHC-P, IF/ICC, ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la ADN (citosina-5)-metiltransferasa 1

DNMT1 es una ADN metiltransferasa esencial responsable de mantener los patrones de metilación de CpG durante la replicación del ADN, garantizando la herencia epigenética. Metila de forma preferencial el ADN hemimetilado y se asocia con los focos de replicación en la fase S, pero también actúa independientemente de la replicación durante las fases G2 y M para preservar el panorama global de metilación. El silenciamiento mediado por DNMT1 implica la interacción directa con HDAC2 y la formación de complejos correpresores que modulan las modificaciones de histonas y la expresión génica. Referencias relacionadas: PMID:17200670, PMID:18754681, PMID:21745816, PMID:26070743, PMID:10888872, PMID:24623306

La enzima se localiza predominantemente en el núcleo y es reclutada a la cromatina en los focos de replicación a través de su dominio RFTS, que reconoce la histona H3 ubiquitinada. También se localiza en regiones perinucleolares, lo que refleja funciones especializadas en el mantenimiento de la heterocromatina. Referencias relacionadas: PMID:12145218, PMID:24492612, PMID:29053958

DNMT1 se expresa de forma ubicua, con niveles especialmente altos en tejidos fetales, corazón, riñón, placenta y células mononucleares de sangre periférica, y una expresión menor en bazo, pulmón, cerebro, intestino delgado, colon, hígado y músculo esquelético. Referencias relacionadas: PMID:10325416

Las modificaciones postraduccionales de DNMT1, especialmente la acetilación, cumplen funciones reguladoras clave. El grupo de lisinas al que dirige este anticuerpo (K1127/K1129/K1131/K1133 en la isoforma 1) corresponde a sitios de acetilación conocidos (K1111/K1113/K1115/K1117/K1119/K1121 en la secuencia canónica) que son modificados por acetiltransferasas de histonas y pueden influir en la estabilidad de la proteína, su localización y su interacción con otros factores epigenéticos. Referencias relacionadas: PMID:21947282, PMID:19608861

Guía experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo policlonal de conejo se obtuvo a partir de un péptido acetilado sintético que incluye K1127, K1129, K1131 y K1133 de DNMT1 humano. Se espera que reconozca específicamente la forma acetilada de la proteína.
• Para IHC-P, pueden requerirse métodos estándar de recuperación de antígenos (por ejemplo, recuperación de epitopos inducida por calor en tampón de citrato, pH 6,0) para exponer el epitopo. La dilución óptima del anticuerpo y las condiciones de incubación deben determinarse de forma empírica.
• Al realizar IF/ICC, se usa comúnmente la fijación con paraformaldehído al 4% seguida de permeabilización con 0,1% de Tritón X-100; sin embargo, estos pasos deben validarse en el sistema específico de células o tejido.
• El ELISA se puede usar para detectar y cuantificar los niveles de DNMT1 acetilado en lisados celulares o extractos de tejido. Considere la posibilidad de emplear un ensayo de competición con péptidos para confirmar la especificidad de unión.
• Dado que DNMT1 se expresa ampliamente, incluya controles positivos y negativos adecuados (por ejemplo, tejidos o líneas celulares con un estado de acetilación conocido) para verificar los patrones de tinción.
• El peso molecular predicho es de 183 kDa; si reutiliza el anticuerpo para aplicaciones no validadas (por ejemplo, Western blot), valide el tamaño de la banda y la especificidad correspondientemente.

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