Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-Acetil-Histona H3 (K14) | Q16695 / P68431 | WB, IF/ICC, ELISA

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Acetil-Histona H3 (K14)

La histona H3 es un componente central del nucleosoma, que envuelve y compacta el ADN en cromatina. Esto limita la accesibilidad del ADN a la maquinaria transcripcional, regulando así la transcripción, la reparación del ADN, la replicación y la estabilidad cromosómica. Las modificaciones postraduccionales de las histonas, denominadas colectivamente el código de histonas, modulan la estructura y función de la cromatina.

Referencias relacionadas:

• La acetilación en la lisina 14 (K14ac) de la histona H3 es una marca bien caracterizada asociada con la cromatina transcripcionalmente activa. Es depositada por histona acetiltransferasas como GCN5/PCAF y eliminada por histona desacetilasas. Es probable que K14ac facilite la relajación de la cromatina al neutralizar la carga positiva de la lisina, reduciendo las interacciones histona-ADN.

Referencias relacionadas: PMID:16185088, PMID:16267050, PMID:16457588

• La histona H3 se localiza principalmente en el núcleo y los cromosomas. La histona H3.1 canónica (codificada por múltiples genes, SWISS P68431) depende de la replicación y se expresa durante todo el ciclo celular. En contraste, la variante específica de testículo H3.1t (SWISS Q16695) se expresa en células testiculares y reemplaza a la H3.1 canónica durante la espermatogénesis.

Referencias relacionadas:

• Este anticuerpo se generó contra un péptido acetilado sintético correspondiente a los residuos alrededor de K14 de la histona H3.1 humana (NP_003520.1). Reconoce la forma acetilada de la lisina 14 tanto en las isoformas H3.1 como H3.1t, permitiendo estudios de K14ac en diversos contextos biológicos.

Referencias relacionadas: PMID:19608861

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Western blot (WB): Para una detección óptima de la acetilación de la histona H3 K14, considere enriquecer las histonas mediante extracción ácida de células tratadas con inhibidores de histona desacetilasas (por ejemplo, ácido tricostatín A, butirato de sodio) para aumentar los niveles de acetilación. Utilice un gel de SDS-PAGE al 15% para una buena resolución. Valide la especificidad del anticuerpo mediante inhibición competitiva con el péptido acetilado o comparando las señales de muestras de tipo silvestre y tratadas con inhibidores de HDAC.
• Inmunofluorescencia/ICC: Fije las células con paraformaldehído al 4% y permeabilice con Tritón X-100 al 0.1%. También se puede utilizar fijación con metanol. Asegúrese de incluir controles apropiados, como competición con péptido, para confirmar los patrones de tinción nuclear.
• ELISA: Utilice el anticuerpo para detectar péptidos de histona H3 acetilada en ensayos basados en placas. Combínelo con un anticuerpo pan-H3 para la normalización.
• Se predice que el anticuerpo reacciona con una amplia gama de especies debido a la alta conservación de secuencia alrededor de K14; sin embargo, se recomienda validarlo en muestras no humanas, de ratón o rata.

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