Anticuerpo monoclonal de conejo Acetil-Histona H3-K18 (Q16695/P68431) | Validado para WB, IHC, ChIP, ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la Histona H3

• La Histona H3 es una proteína nucleosómica central que envuelve y compacta el ADN en cromatina, limitando la accesibilidad a las maquinarias dependientes del ADN y desempeñando un papel central en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. Referencias relacionadas: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Se localiza en el núcleo y se asocia con los cromosomas. Referencias relacionadas: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Referencias relacionadas: UniProtKB Q16695

• La Histona H3 sufre modificaciones postraduccionales extensas que constituyen el "código de histonas". La acetilación en K18 (posición 19 en la secuencia canónica de H3) es una marca clave asociada a la activación transcripcional y la reparación del ADN. Esta modificación está regulada dinámicamente por HAT y HDAC. La acetilación en este sitio ha sido documentada en múltiples estudios. Referencias relacionadas: PMID:19608861, PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708, PMID:35939806

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido acetilado sintético alrededor de K18 de la Histona H3 humana. Se espera que el anticuerpo monoclonal de conejo resultante reconozca específicamente la H3K18 acetilada, sin reacción cruzada con K18 no modificada u otros sitios de acetilación. Valide la especificidad mediante ensayos de competición con péptidos acetilados y no acetilados, o tratando las células con inhibidores de HDAC.
• Para la transferencia Western (WB), se anticipa una banda única de ~16 kDa. Utilice controles de carga adecuados (por ejemplo, anticuerpos contra Histona H3 total o el extremo C de H3) para normalizar los niveles de acetilación. Las señales de acetilación pueden aumentarse tratando las células con inhibidores de desacetilasas como la tricostatina A (TSA) o el butirato de sodio.
• Para inmunohistoquímica (IHC-P) e inmunofluorescencia (IF/ICC), optimice las condiciones de recuperación de antígeno y permeabilización. Se recomienda el bloqueo de peroxidasa endógena para IHC-P. Valide la tinción comparando con controles de isotipo.
• Para inmunoprecipitación de cromatina (ChIP), asegúrese de que las condiciones de reticulación estén optimizadas para modificaciones de histonas. Utilice loci de control positivo y negativo adecuados (por ejemplo, genes transcritos activamente frente a loci silenciados). La eficiencia de enriquecimiento se puede verificar mediante qPCR.
• Debido a la reactividad cruzada amplia predicha (humano, ratón, rata y otros), confirme la reactividad en la especie de interés antes de proceder a experimentos a gran escala. La alineación de secuencias muestra una alta conservación de la región que rodea a K18 en todos los vertebrados.
• Para aplicaciones de ELISA y blot de puntos (DB), el anticuerpo se puede usar para detectar péptidos de H3K18 acetilados o histonas recombinantes. Considere el uso de un anticuerpo secundario biotinilado y estreptavidina-HRP para la amplificación de la señal.

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