Anticuerpo monoclonal de conejo para Histona H3-K27 acetilada (Q16695/P68431) para WB, ChIP, IF, IHC

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la histona H3 (H3.1/H3.1t)

• La histona H3 es un componente central del nucleosoma, la unidad repetitiva fundamental de la cromatina. Los nucleosomas envuelven y compactan el ADN, regulando así el acceso al material genético para la transcripción, replicación del ADN, reparación y recombinación. Esta arquitectura es esencial para la estabilidad cromosómica y el correcto funcionamiento celular. Referencias relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431.

• En humanos, existen múltiples variantes no alélicas de la histona H3, que incluyen las proteínas canónicas H3.1 dependientes de la replicación (codificadas por genes como H3C1, H3C2, etc., GeneIDs: 8350, 8290) y la variante H3.1t específica de testículo (codificada por H3-4, también conocido como H3FT, HIST3H3). La H3.1 canónica se expresa de forma ubicua, mientras que la expresión de H3.1t está restringida a las células testiculares. Referencias relacionadas: UniProt Q16695 (especificidad tisular).

• Tanto H3.1 como H3.1t se localizan en el núcleo y se asocian a los cromosomas. Contienen un dominio de pliegue de histona que media su incorporación a los nucleosomas y una cola N-terminal que sobresale del nucleosoma, sirviendo como plataforma para una gran cantidad de modificaciones postraduccionales (MPT). Referencias relacionadas: UniProt P68431.

• La cola N-terminal de la histona H3 está sujeta a extensas MPT que incluyen acetilación, metilación, fosforilación, citrulinación y otras, conocidas colectivamente como el "código de histonas". Estas modificaciones organizan la dinámica de la cromatina y los patrones de expresión génica. La acetilación de residuos de lisina, como en la posición 27 (K27), es una marca distintiva de regiones de cromatina activa que incluyen potenciadores y promotores, facilitando una configuración de cromatina abierta que promueve la activación génica. Referencias relacionadas: UniProt P68431 (resumen de MPT).

• El anticuerpo aquí descrito se generó frente a un péptido sintético correspondiente a la lisina 27 acetilada de la histona H3 humana (isoforma H3.1, NP_003520.1). Reconoce específicamente la forma acetilada y es adecuado para detectar esta modificación en una variedad de aplicaciones.

Orientación experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo se generó usando un inmunógeno de péptido acetilado sintético; tenga en cuenta que puede reconocer el epitopo tanto en conformaciones lineales (desnaturalizadas) como nativas, lo que lo hace adecuado para aplicaciones como Western blot (WB), inmunoprecipitación y ensayos basados en cromatina.
• Para WB, el peso molecular predicho de la histona H3 es de ~15 kDa. Sin embargo, las histonas pueden migrar de forma anómala dependiendo de las condiciones del gel; incluya controles positivos apropiados (por ejemplo, lisado total de células HeLa) y marcadores de peso molecular.
• En aplicaciones de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) y CUT&Tag, confirme la especificidad y eficiencia del anticuerpo realizando ensayos de competición con péptidos e incluyendo loci diana conocidos (por ejemplo, potenciadores activos marcados por H3K27ac) como controles positivos.
• Debido a la amplia reactividad cruzada predicha (Humano, Ratón, Rata y otros), este anticuerpo puede ser adecuado para diversas especies, pero se recomienda su validación en el sistema de muestra específico.
• Para inmunofluorescencia (IF/ICC) e inmunohistoquímica (IHC-P), la accesibilidad del epitopo puede verse influenciada por los protocolos de fijación y permeabilización; se recomienda la optimización de estos pasos.
• El rendimiento del anticuerpo en ELISA y dot blot (DB) se puede evaluar usando péptidos acetilados frente a péptidos no acetilados para evaluar la especificidad.

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