Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-Acetil-Histona H3 (Lys4) para WB, ChIP, IF | Q16695/P68431

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H3

• La histona H3 es un componente central del nucleosoma, que envuelve y compacta el ADN en cromatina. Esto limita la accesibilidad del ADN a la maquinaria celular que requiere el ADN como plantilla, desempeñando así un papel central en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. Referencias relacionadas: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• La accesibilidad del ADN se rige por una compleja matriz de modificaciones postraduccionales (PTM) en las histonas, denominadas colectivamente "código de histonas", y el remodelado de nucleosomas. Estas PTM incluyen acetilación, metilación, fosforilación, citrulinación, ADP-ribosilación y varias acilaciones. Referencias relacionadas: PMID:19608861, PMID:16267050, PMID:17194708

• La histona H3 se localiza principalmente en el núcleo y se asocia con los cromosomas a lo largo del ciclo celular. Referencias relacionadas: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Mientras que la histona H3.1 canónica (codificada por múltiples genes, p. ej., HIST1H3A) se expresa ampliamente, la variante H3.1t (H3-4, HIST3H3) se expresa específicamente en células testiculares, lo que sugiere roles especializados en la organización de la cromatina durante la espermatogénesis. Referencias relacionadas: UniProtKB Q16695

• La acetilación de la lisina 4 en la histona H3 (H3K4ac) es una modificación bien caracterizada asociada con promotores activos y cromatina abierta. A menudo coexiste con otras marcas de activación y es leída por proteínas que contienen dominios de bromodominio para facilitar la activación transcripcional.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido acetilado sintético correspondiente a los residuos alrededor de K4 de la histona H3 humana. Debido a la alta conservación de la cola N-terminal entre especies, se predice la reactividad cruzada con muestras de ratón y rata; sin embargo, es aconsejable verificar el rendimiento en el modelo experimental específico.

• Para ensayos de ChIP, considere validar la especificidad del anticuerpo con péptidos competidores acetilados y no acetilados para confirmar el enriquecimiento en los loci diana.

• En Western blotting, la histona H3 migra aproximadamente a 15 kDa. Optimice el porcentaje de gel y las condiciones de transferencia para proteínas de bajo peso molecular; se recomiendan lisados proteicos nucleares o extraídos con ácido para una señal enriquecida.

• Para inmunofluorescencia, pruebe diferentes protocolos de fijación (p. ej., PFA al 4% frente a metanol) y permeabilización, ya que estos pueden influir en la accesibilidad del epítopo y el fondo.

• Dado el amplio rango de modificaciones en el extremo N-terminal de la H3, asegúrese de que la detección no se vea afectada por PTM vecinas utilizando controles apropiados y, si es posible, histonas mutantes o proteínas recombinantes.

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