Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-Histona H4 Acetilada (K12) para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P62805

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H4

La Histona H4 es una de las cuatro histonas centrales que forman el nucleosoma, la unidad repetitiva fundamental de la cromatina. Como proteína estructural altamente conservada, desempeña un papel esencial en el empaquetamiento y organización del ADN dentro del núcleo, influyendo directamente en la expresión génica, la replicación y reparación del ADN, y la estabilidad cromosómica.

Referencias relacionadas: UniProtKB P62805

La función de la Histona H4 está regulada dinámicamente por una amplia gama de modificaciones postraduccionales (PTM), denominadas colectivamente 'código de histonas'. La acetilación en residuos específicos de lisina, incluida la lisina 12 (K12, correspondiente a K13 en UniProt P62805), es una marca epigenética clave que modula la estructura de la cromatina y promueve la transcripción activa. La acetilación en este residuo ha sido documentada en múltiples estudios.

Referencias relacionadas: PMID:17967882 PMID:2474456 PMID:7664735 PMID:19608861

La localización subcelular de la Histona H4 es predominantemente nuclear, donde se asocia con el ADN cromosómico. Patrones específicos de acetilación, como en K12, pueden influir en su dinámica de localización durante procesos como la espermatogénesis.

Referencias relacionadas: UniProtKB P62805

Estructuralmente, la proteína Histona H4 tiene aproximadamente 11.4 kDa, y está codificada por múltiples copias génicas (p. ej., H4C1, H4C2, etc.) que producen una secuencia proteica idéntica. Esta multiplicidad asegura los altos niveles de expresión requeridos para el ensamblaje de la cromatina. Debido a la extrema conservación evolutiva de la secuencia de la Histona H4 entre especies, los anticuerpos dirigidos a esta proteína a menudo exhiben una amplia reactividad cruzada.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Diseño del Inmunógeno: Este anticuerpo se generó contra un péptido sintético acetilado alrededor de K12. Para una detección específica, considere que el anticuerpo puede reconocer preferentemente la forma acetilada; la validación con muestras tratadas con inhibidores de desacetilasas puede mejorar la señal.
• Western Blotting (WB): La Histona H4 tiene un peso molecular bajo (~11 kDa). Utilice geles de SDS-PAGE al 15% o gradiente y asegure una transferencia eficiente (p. ej., transferencia húmeda durante la noche a bajo voltaje) para evitar la pérdida de proteínas pequeñas. Incluya marcadores de peso molecular apropiados y confirme la especificidad utilizando ensayos de competición con péptido no acetilado si es necesario.
• Inmunohistoquímica (IHC-P) e Inmunofluorescencia (IF/ICC): La recuperación antigénica (p. ej., con buffer de citrato, pH 6.0) puede mejorar la accesibilidad del epítopo. Utilice tejidos control positivo con transcripción activa o proliferación (p. ej., testículo, timo) y considere bloquear la biotina o peroxidasas endógenas según los protocolos estándar.
• ELISA: Para análisis cuantitativo, recubra las placas con péptido de H4 acetilado o extractos de histonas y verifique la especificidad del péptido utilizando controles no acetilados.
• Reactividad Cruzada: Se predice que el anticuerpo reacciona de forma cruzada con la Histona H4 acetilada de humano, ratón, rata y muchas otras especies. Valide en su sistema experimental para descartar la unión a H4 no acetilada u otras proteínas acetiladas, particularmente dada la naturaleza policlonal del anticuerpo.
• Enfoques Alternativos: Si se requiere una alta especificidad únicamente para la marca acetil-K12, considere combinar con un anticuerpo monoclonal o utilizar ensayos de competición sitio-específicos para confirmar el reconocimiento del epítopo.

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