Anticuerpo policlonal de conejo anti-Acetil-Histona H4-K5 (P62805) – Validado para WB, IHC-P, ELISA, ChIP

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H4

• La Histona H4 es un componente central del nucleosoma, responsable de envolver y compactar el ADN en cromatina. Esta compactación restringe la accesibilidad del ADN, desempeñando así un papel central en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. Referencias relacionadas: UniProt P62805

• La proteína se localiza principalmente en el núcleo y se asocia con los cromosomas. Se ha observado que se localiza en el núcleo cuando está acetilada en espermátidas en estadio 11. Referencias relacionadas: UniProt P62805

• La Histona H4 sufre extensas modificaciones postraduccionales (PTM) en su cola N-terminal, que en conjunto constituyen el "código de histonas". La acetilación en la lisina 5 (el objetivo de este anticuerpo) es una modificación clave asociada con estados de cromatina activa. Referencias relacionadas: PMID:2474456, PMID:7664735, PMID:19608861

• Modificaciones adicionales incluyen metilación, fosforilación y varias acilaciones, que se coordinan para regular la expresión génica y otros procesos con plantilla de ADN. Referencias relacionadas: UniProt P62805

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Diseño del inmunógeno: El anticuerpo se generó contra un péptido sintético que abarca los aminoácidos 1-100 de la Histona H4 humana, que incluye la cola N-terminal y el epítopo de Lys5 acetilada. Considere usar un péptido no acetilado o un mutante (K5A) como control negativo para confirmar la especificidad.
• Western Blot (WB): La Histona H4 tiene un peso molecular predicho de ~11 kDa. Asegure una separación adecuada en geles SDS-PAGE de alto porcentaje (ej., 15-18%) y verifique la intensidad de la banda normalizada con los controles de carga total de histonas (ej., Histona H3, H4 total).
• Inmunohistoquímica-Paraffina (IHC-P): Se recomienda la recuperación antigénica debido a la naturaleza compacta de la cromatina; se pueden probar buffer de citrato (pH 6.0) o Tris-EDTA (pH 9.0). Los patrones de acetilación pueden variar según el tejido y las condiciones de fijación.
• ELISA: El anticuerpo se puede usar para detectar péptidos de histonas acetiladas o histonas extraídas con ácido y recubiertas directamente en placas. Optimice la concentración de recubrimiento y los pasos de bloqueo para minimizar el fondo.
• Inmunoprecipitación de Cromatina (ChIP): Apto para el mapeo genómico de loci H4K5ac. El tiempo de entrecruzamiento y las condiciones de fragmentación de la cromatina deben determinarse empíricamente para cada tipo de muestra. Se recomienda un Western blot post-ChIP para confirmar el enriquecimiento.
• Reactividad cruzada: La secuencia del inmunógeno está altamente conservada entre humano, ratón y rata, y el fabricante predice un amplio rango de reactividad. Valide en su especie de interés mediante alineamiento de secuencias y pruebas preliminares.

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