Anticuerpo policlonal de conejo contra Acetil-HMGB1 (Lys29) (P09429) para WB, IF/ICC, ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la proteína B1 del grupo de alta movilidad (HMGB1)

• La HMGB1 es una proteína cromosómica no histónica altamente abundante y expresada de forma ubicua que funciona como chaperona de ADN, regulando la transcripción, la replicación, la reparación del ADN y la estabilidad del genoma. También actúa como un patrón molecular asociado al daño (DAMP) extracelular durante lesiones e inflamación. Referencias relacionadas: PMID:33147444, PMID:27362237

• La localización subcelular de la HMGB1 está regulada dinámicamente. En condiciones basales, reside predominantemente en el núcleo, pero se desplaza continuamente entre el núcleo y el citoplasma. Tras ciertos estímulos o estrés, experimenta modificaciones postraduccionales, incluida la acetilación de residuos de lisina clave dentro de sus señales de localización nuclear (NLS1: aa 28-44, NLS2: aa 179-185), lo que promueve su acumulación citoplasmática y su secreción activa a través de una vía no convencional mediada por lisosomas. Referencias relacionadas: PMID:12231511, PMID:17114460

• La acetilación en Lys29 (K29) es una de las diversas modificaciones críticas que regulan el tráfico de la HMGB1. La hiperacetilación de la región NLS1, incluida la K29, interrumpe la importación nuclear y facilita la reubicación de la HMGB1 al citoplasma y su eventual liberación al espacio extracelular, donde puede ejercer actividades similares a las de las citoquinas. Referencias relacionadas: UniProt P09429

• En el entorno extracelular, el estado redox de la HMGB1 dicta su función: la HMGB1 totalmente reducida actúa como quimiocina, la HMGB1 disulfuro como citoquina y la HMGB1 oxidada promueve la tolerancia inmunológica. La HMGB1 extracelular se une a receptores como RAGE, TLR2 y TLR4 para activar respuestas inmunes innatas, lo que la convierte en un mediador crítico en la sepsis, enfermedades autoinmunes y cáncer. Referencias relacionadas: PMID:23446148, PMID:23519706

• La HMGB1 también desempeña funciones en la patogénesis microbiana, facilitando la entrada del SARS-CoV-2 y otros virus, y regulando la autofagia y la activación del inflamasoma. Referencias relacionadas: PMID:35239449, PMID:22696656

Guía experimental y consejos técnicos

• Debido a la naturaleza reversible de la acetilación, incluya inhibidores de desacetilasa (p. ej., tricostatina A, nicotinamida) en los tampones de lisis para preservar la HMGB1 acetilada durante la preparación de la muestra.
• Para Western blotting, el peso molecular esperado de la HMGB1 es de ~25 kDa, pero las modificaciones postraduccionales pueden causar ligeros desplazamientos. Utilice células en fase logarítmica temprana o estimuladas como controles positivos.
• En inmunofluorescencia/ICC, la señal de acetil-HMGB1-K29 puede ser predominantemente citoplasmática o extracelular tras la inducción de la acetilación (p. ej., tratamiento con LPS) en comparación con la tinción nuclear en células en reposo.
• Para aplicaciones de ELISA, considere utilizar este anticuerpo como reactivo de captura o detección emparejado con un anticuerpo pan-HMGB1 para cuantificar específicamente la HMGB1 acetilada en fluidos biológicos.
• Se ha indicado reactividad cruzada con HMGB1 de ratón y rata; sin embargo, se recomienda la validación en el sistema de muestra relevante.

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