Anticuerpo Policlonico Anti-53BP1 para WB, IHC-P, ELISA - Q12888

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Proteína de Unión a TP53 1

• 53BP1, también conocida como p202, TDRD30 o p53BP1, es una proteína clave para la reparación de roturas de doble cadena (DSB) que participa en la respuesta al daño del ADN, la dinámica de los telómeros y la recombinación de cambio de clase (RCC) durante la generación de anticuerpos. Referencias relacionadas: PMID:12364621 PMID:17190600 PMID:21144835

• Promueve la reparación de DSB mediada por la unión de extremos no homólogos (NHEJ) y contrarresta específicamente la reparación por recombinación homóloga (RH) dependiente de BRCA1. Referencias relacionadas: PMID:22553214 PMID:23333306 PMID:23727112

• Tras el daño al ADN, la fosforilación de 53BP1 mediada por ATM promueve su interacción con RIF1 y su disociación de TIRR, facilitando su reclutamiento en los sitios de DSB. Referencias relacionadas: PMID:28241136

• 53BP1 es reclutada a los DSB al reconocer la histona H2A monoubiquitinada en K15 (H2AK15Ub) y la histona H4 dimetilada en K20 (H4K20me2). Referencias relacionadas: PMID:17190600 PMID:23760478 PMID:27153538

• Es necesaria para la recombinación de cambio de clase (RCC) de inmunoglobulinas, un proceso que genera DSB en el ADN. Referencias relacionadas: PMID:23345425

• 53BP1 también promueve la NHEJ en telómeros disfuncionales a través de su interacción con PAXIP1. Referencias relacionadas: PMID:23727112

• Subcelularmente, 53BP1 se localiza en el núcleo, los cromosomas y específicamente en los centrómeros y cinetocoros.

• El empalme alternativo genera múltiples isoformas de 53BP1, lo que contribuye a la diversidad funcional en la reparación del ADN.

Orientación Experimental y Consejos Técnicos

• Como anticuerpo policlonal generado contra un fragmento recombinante (aa 895-1031), se espera que reconozca la proteína 53BP1 de longitud completa (~214 kDa) y posiblemente productos de degradación en transferencia western. Optimice los controles de exposición y carga de muestra.
• Para WB, se suele utilizar un rango de dilución inicial típico de 1:500–1:2000 para anticuerpos policlonales; sin embargo, la concentración de trabajo óptima debe determinarse empíricamente en su sistema de muestras.
• En IHC-P, puede ser necesaria la recuperación de antígeno debido a la localización nuclear de 53BP1; valide la especificidad de la tinción con controles de tejido adecuados y considere el uso de una contratinción nuclear.
• El anticuerpo presenta reactividad cruzada con la 53BP1 de ratón y rata, según confirmación del proveedor, lo que lo hace útil para estudios traslacionales; no obstante, se debe considerar la alineación de la secuencia de la región del inmunógeno entre especies.
• Dado que 53BP1 es una fosfoproteína involucrada en la señalización por daño al ADN, el tratamiento de células con agentes dañinos del ADN (por ejemplo, radiación ionizante, etopósido) puede mejorar la detección de la formación de focos en inmunofluorescencia o modular la señal en WB.
• Para ELISA, el anticuerpo se puede usar para capturar o detectar fragmentos recombinantes de 53BP1 o lisados celulares; se deben optimizar las condiciones adecuadas de bloqueo y lavado.

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