Anticuerpo monoclonal anti-AMPK alfa 1/2 para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q13131 / P54646

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de AMPK alfa 1/2

• La subunidad catalítica alfa-1 de AMPK (PRKAA1) actúa como un sensor central de energía, activando las vías catabólicas e inhibiendo los procesos anabólicos ante el estrés energético celular para restaurar los niveles de ATP. Referencias relacionadas: PMID:17307971 PMID:17712357 PMID:24563466
• En el metabolismo lipídico, AMPK fosforila e inactiva directamente la acetil-CoA carboxilasa (ACACA/ACACB) y la HMG-CoA reductasa (HMGCR), suprimiendo así la síntesis de ácidos grasos y colesterol.
• AMPK regula la reprogramación transcripcional mediante la fosforilación de factores de transcripción y coactivadores clave (p. ej., CRTC2, FOXO3, SREBF1, PPARGC1A) y de la histona H2B, modulando la expresión de genes metabólicos. Referencias relacionadas: PMID:11518699 PMID:11554766 PMID:15866171
• Mediante la fosforilación de RPTOR y TSC2, AMPK inhibe el complejo mTORC1, lo que provoca una regulación negativa del crecimiento y la proliferación celular, y promueve la autofagia en condiciones de privación de nutrientes. Referencias relacionadas: PMID:14651849 PMID:18439900 PMID:20160076 PMID:21205641
• A nivel subcelular, AMPK alfa-1 se localiza predominantemente en el citoplasma y el núcleo, y también se detecta en endosomas tardíos, en consonancia con sus diversas funciones de señalización.
• La proteína está sujeta a una fosforilación extensa en múltiples residuos de serina/treonina y, según su identificación mediante proteómica, puede presentar glucosilación ligada a N.
• AMPK alfa-1 también presenta actividad de proteína cinasa de tau y puede fosforilar MAPT/TAU en respuesta al beta-amiloide, aunque la importancia in vivo aún no está clara.
• Este anticuerpo reconoce tanto la subunidad catalítica alfa-1 (codificada por PRKAA1, UniProt Q13131) como la subunidad alfa-2 altamente homóloga (codificada por PRKAA2, UniProt P54646), por lo que constituye una herramienta pan-AMPK-alfa.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca los residuos 13–300 de AMPK alfa-1 humana, incluido el dominio cinasa. Esta región está bien conservada entre humanos, ratones y ratas, lo que respalda la amplia reactividad cruzada entre especies descrita.
• Para Western blot, se espera una banda predominante de aproximadamente 64 kDa. La AMPK alfa-1 endógena se expresa ampliamente; considere utilizar lisados de líneas celulares como HeLa y HEK293T, o tejidos como hígado y músculo esquelético, como controles positivos.
• En inmunofluorescencia e inmunohistoquímica, se esperan señales tanto citoplasmáticas como nucleares. La localización subcelular puede cambiar bajo condiciones específicas de estrés (p. ej., privación de glucosa o activadores de AMPK), por lo que los protocolos de fijación y permeabilización deben optimizarse para el compartimento diana.
• Para los ensayos basados en ELISA, la naturaleza monoclonal de este anticuerpo garantiza la uniformidad entre lotes; sin embargo, los usuarios deben validar las condiciones óptimas de recubrimiento y detección en su sistema de ensayo específico.

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