Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-APAF1 para WB y ELISA - O14727

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de APAF1

• APAF1 (factor 1 activador de proteasas apoptóticas), también conocido como CED4 o APAF-1, está codificado por el gen APAF1 (KIAA0413) y existe en múltiples isoformas debido al empalme alternativo.
• La proteína funciona como componente central del apoptosoma: el APAF1 oligomérico media la activación autoproteolítica dependiente de citocromo c de la procaspasa-9, activando posteriormente la caspasa-3 para ejecutar la apoptosis; este proceso requiere la unión a ATP.
• APAF1 es una proteína de múltiples dominios que contiene un dominio de reclutamiento de caspasas N-terminal (CARD), un dominio central de unión a nucleótidos y oligomerización (NOD) y regiones de repetición WD40 C-terminales críticas para la unión al citocromo c.
• Subcelularmente, APAF1 se encuentra predominantemente en el citoplasma en condiciones normales, y tras la inducción de apoptosis, se transloca al complejo del apoptosoma.
• Su expresión es ubicua, con niveles más altos detectados en el bazo adulto, leucocitos de sangre periférica, cerebro fetal, riñón y pulmón; la isoforma 1 se encuentra específicamente en corazón, riñón e hígado.
• La proteína presenta unión a ATP/dATP y está regulada probablemente por calcio, como indican las asociaciones de palabras clave, y cuenta con repeticiones WD esenciales para las interacciones proteína-proteína.
• Palabras clave: Estructura 3D, Empalme alternativo, Apoptosis, Unión a ATP, Calcio, Citoplasma, Secuenciación directa de proteínas, Unión a nucleótidos, Identificación proteómica, Proteoma de referencia, Repetición, Repetición WD.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 470-600 de APAF1 humano (región NOD central), lo que garantiza la detección de variantes de longitud completa y truncadas, pero debe verificarse la especificidad en los modelos celulares correspondientes.
• Para la transferencia Western, tenga en cuenta que APAF1 migra a múltiples pesos moleculares (38-142 kDa) debido a la diversidad de isoformas y la escisión por caspasas; el patrón de bandas puede variar según el tipo de célula y los estímulos apoptóticos.
• Las aplicaciones de ELISA se pueden desarrollar usando una curva de patrón de APAF1 recombinante; incluya controles positivos (por ejemplo, lisados de Jurkat tratados con estaurosporina) y negativos adecuados para validar la especificidad del ensayo.
• Se espera reactividad cruzada con APAF1 de ratón basada en la homología de secuencia, pero se recomienda la confirmación empírica en tejidos o líneas celulares de ratón.
• Se aconseja optimizar la dilución del anticuerpo, las condiciones de incubación y los reactivos de detección para cada sistema experimental.

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