Anticuerpo policlonal de conejo Anti-APLF para WB, ELISA - Q8IW19

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de APLF

• APLF actúa como una chaperona de histonas esencial para la reparación de roturas de ADN de hebra simple y doble hebra.
  Referencias relacionadas: PMID:17353262, PMID:17396150, PMID:21211721
• Es reclutado a sitios de daño del ADN al unirse a cadenas ramificadas de poli-ADP-ribosa, donde promueve la expulsión de histonas y el reclutamiento de la variante de histona MACROH2A1.
  Referencias relacionadas: PMID:21211722, PMID:29905837, PMID:30104678
• APLF posee actividades de endonucleasa apurínica-apirimídica (AP) y exonucleasa 3'-5', y puede introducir roturas en hidrouracilo y otros daños de bases pirimidínicas in vitro.
  Referencias relacionadas: PMID:17353262, PMID:17396150
• En la vía de unión de extremos no homólogos (NHEJ), APLF colabora con PARP3 para retener el complejo LIG4-XRCC4 en la cromatina, acelerando la ligación del ADN.
  Referencias relacionadas: PMID:21211721, PMID:23689425
• APLF regula negativamente la pluripotencia celular al promover el intercambio de histonas y es necesario para la implantación embrionaria durante la transición epitelial-mesenquimal en hembras.
• Subcelularmente, APLF se localiza en el núcleo, los cromosomas y el citoplasma/citosol, lo que coincide con sus funciones de reparación del ADN y regulación de la cromatina.
• Los motivos estructurales incluyen un dominio FHA, repeticiones de dedos de zinc y sitios de fosforilación y ADP-ribosilación, lo que resalta su papel en las respuestas al daño del ADN dependientes de señales.

Guía experimental y consejos técnicos

• Para Western blot, se espera una banda cercana a 57 kDa en muestras de origen humano; incluya un control positivo como el inmunógeno recombinante (aa 200-380) para confirmar la detección.
• Dado que se ha observado reactividad cruzada con rata, valide el anticuerpo en lisados de células o tejido de rata si su investigación involucra modelos de roedores.
• Para aplicaciones de ELISA, la recubrimiento con el fragmento recombinante de APLF puede mejorar la especificidad de la señal; las condiciones del ensayo deben optimizarse empíricamente.
• Dada la localización nuclear y citoplasmática de APLF, considere la fraccionamiento subcelular para enriquecer el objetivo y obtener una detección más sensible en WB.
• Debido a que APLF participa en la reparación del daño del ADN, el tratamiento con agentes dañinos del ADN puede aumentar el reclutamiento de la proteína a la cromatina; los experimentos de curso temporal pueden revelar cambios dinámicos de localización.

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