Anticuerpo policlonal de conejo Anti-APP (validado por KO) para WB y ELISA - P05067

Especificaciones y parámetros principales del producto

Información biológica: Función y localización de APP

• La proteína precursora de beta amiloide (APP) es una glicoproteína transmembranal con varias isoformas generadas por empalme alternativo; la isoforma neuronal principal es APP695, mientras que APP751 y APP770 se expresan en células no neuronales, y el appican se expresa en astrocitos.
• APP actúa como receptor de superficie celular involucrado en el crecimiento de neuritas, la adhesión neuronal y la axonogénesis; las interacciones entre moléculas de APP en células adyacentes promueven la sinaptogénesis.
  Referencias relacionadas: PMID:25122912
• APP funciona como receptor de membrana de la quinesina I, mediando el transporte axonal de beta-secretasa y presenilina 1, lo cual es crucial para el transporte de carga hacia las sinapsis.
  Referencias relacionadas: PMID:17062754, PMID:23011729
• Los péptidos de beta amiloide, derivados de la proteólisis de APP, son quelantes lipofílicos de metales que se unen a cobre, zinc y hierro, y pueden reducir Cu²⁺ y Fe³⁺; promueven la agregación de tau y la fosforilación mediada por TPK II, y su interacción con HADH2 sobreexpresado contribuye al estrés oxidativo.
• Los péptidos Gamma-CTF y los fragmentos cortados por caspasas, como C31, son potenciadores potentes de la apoptosis neuronal.
• APP contiene un dominio inhibidor de serina proteasa de tipo Kunitz (BPTI) en algunas isoformas, que le confiere actividad de inhibidor de proteasas, y sufre modificaciones postraduccionales extensas que incluyen N- y O-glicosilación, fosforilación y sulfatación.
• Subcelularmente, APP se localiza en la membrana celular, las fosas recubiertas de clatrina, los endosomas tempranos, el retículo endoplásmico, el aparato de Golgi y las vesículas citoplasmáticas, además de ser secretado; también se puede detectar en el núcleo y el citoplasma.
• APP se expresa en el cerebro y el líquido cefalorraquídeo, con niveles más altos en el lóbulo frontal de la corteza; también se encuentra en riñón, corazón, bazo y plasma. La isoforma APP695 predomina en las neuronas, mientras que APP751 y APP770 se expresan en células no neuronales (PubMed:2649245).
  Referencias relacionadas: PMID:2649245

Guía experimental y consejos técnicos

• Debido al diseño del inmunógeno (aminoácidos 1-100 de Aβ42 humano), se espera que el anticuerpo reconozca tanto a la APP de longitud completa (~87 kDa) como a los fragmentos proteolíticos que contienen beta amiloide, como CTF99, CTF83 y los péptidos Aβ, en Western blot. La validación en muestras de tipo silvestre frente a muestras con knockout de APP puede ayudar a confirmar la especificidad, dado su estatus de validado por KO.
• Para ELISA, se recomienda combinar este anticuerpo policlonal con un anticuerpo monoclonal que reconozca un epitopo diferente de APP para desarrollar un ensayo sándwich sensible. Se recomienda optimizar las condiciones de recubrimiento y detección.
• Aunque el anticuerpo se generó contra APP humana y muestra reactividad cruzada con muestras humanas, los usuarios que trabajen con otras especies deben realizar una validación adecuada debido a la posible divergencia de secuencia.
• El anticuerpo se envía en bolsas de hielo para mantener su estabilidad; al recibirlo, alicuotarlo y almacenarlo a -20 °C o -80 °C para evitar ciclos repetidos de congelación y descongelación.

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