Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-Histona H3-R17 DiMetil-Asimétrica (Q16695/P68431) para WB, IF/ICC, ELISA

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H3-R17 DiMetil-Asimétrica

• La histona H3 es un componente central del nucleosoma, que envuelve el ADN en cromatina y desempeña un papel fundamental en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica. Las modificaciones postraduccionales (PTM) de las histonas, conocidas colectivamente como el código de histonas, gobiernan la accesibilidad y la función de la cromatina.
• La dimetilación asimétrica de la histona H3 en la arginina 17 (H3R17me2a; correspondiente a la posición 18 en la secuencia canónica de UniProt) es catalizada por la arginina metiltransferasa de proteínas CARM1 (arginina metiltransferasa 1 asociada a coactivadores). Esta modificación se asocia con la activación transcripcional y el reclutamiento de complejos coactivadores.
• Tanto la histona H3.1 canónica (codificada por múltiples genes como H3C1, H3C2, etc.; UniProt P68431) como la variante específica de testículo H3.1t (H3-4; UniProt Q16695) portan esta modificación. H3.1t se expresa en células testiculares, mientras que H3.1 se expresa ubicuamente en células somáticas.
• La histona H3 se localiza en el núcleo y se encuentra predominantemente en nucleosomas a lo largo de los cromosomas. La cola N-terminal, donde se encuentra la R17, sobresale del núcleo del nucleosoma y es un punto clave para numerosas PTM que regulan la expresión génica.
• El inmunógeno péptido sintético corresponde a los primeros 100 aminoácidos de la histona H3 humana, una región muy conservada entre los eucariotas, lo que explica la amplia reactividad cruzada predicha de este anticuerpo. Referencias relacionadas:
• PMID:15345777
• PMID:15471871
• PMID:16497732
• UniProt Q16695
• UniProt P68431

Orientación Experimental y Consejos Técnicos

• Para la transferencia Western (Western blotting, WB), se recomiendan histonas extraídas con ácido o lisados celulares totales de líneas celulares relevantes. El peso molecular esperado de la histona H3 es de aproximadamente 15 kDa. Considere el uso de ensayos de competencia con péptidos o muestras con knockout de CARM1 para confirmar la especificidad de detección de la modificación dimetil-R17 asimétrica.
• En inmunofluorescencia/inmunocitoquímica (IF/ICC), las condiciones de fijación y permeabilización influyen significativamente en la accesibilidad del epítopo. La fijación con metanol a menudo mejora la señal nuclear; optimice la dilución del anticuerpo y los pasos de bloqueo para minimizar el fondo.
• Para ELISA, el anticuerpo puede utilizarse con péptidos sintéticos para distinguir la dimetil-R17 asimétrica de los péptidos H3 dimetilados simétricos o no modificados. Incluya los controles apropiados para garantizar la especificidad.
• Debido a la amplia reactividad cruzada predicha, valide el anticuerpo en su especie y modelo de tejido específicos antes de aplicarlo a experimentos críticos.
• Este anticuerpo es miembro de la categoría de Anticuerpos Metilados y es adecuado para la investigación epigenética. Aunque no se ha validado aquí para inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) o análisis multiplex, puede integrarse con otros reactivos específicos de modificaciones de histonas para dichas aplicaciones con la optimización adecuada.

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