Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-ATG4D para WB, IF/ICC, ELISA - Q86TL0

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de ATG4D

• ATG4D es una cisteína proteasa que juega un papel clave en la autofagia al mediar tanto la activación proteolítica como la deslipidación de las proteínas de la familia ATG8. Escinde el aminoácido C-terminal de MAP1LC3 y GABARAPL2 para exponer un residuo de glicina esencial para la conjugación con fosfatidiletanolamina (PE) y la inserción en la membrana. Referencias relacionadas: PMID:21177865
• Además de la activación proteolítica, ATG4D cataliza la deslipidación de las proteínas ATG8 conjugadas con PE durante la macroautofagia y de las proteínas ATG8 conjugadas con fosfatidilserina (PS) en la autofagia no canónica, actuando como la principal enzima de deslipidación entre los miembros de la familia ATG4. Referencias relacionadas: PMID:29458288, PMID:33909989
• ATG4D está involucrado en el crecimiento del fagóforo durante la mitofagia independientemente de su actividad proteasa, regulando el tráfico de ATG9A a las mitocondrias y promoviendo contactos fagóforo-retículo endoplásmico durante la transferencia de lípidos. Referencias relacionadas: PMID:33773106
• La proteína actúa como un regulador de la autofagia que vincula la disfunción mitocondrial con la apoptosis; su importación mitocondrial durante el estrés celular y la diferenciación influye en la fisiología mitocondrial, los niveles de ROS, la mitofagia y la viabilidad celular.
• Subcelularmente, ATG4D se localiza en el citoplasma y en la matriz mitocondrial, consistente con sus roles duales en la regulación de la autofagia y mitocondrial.
• Se expresa ampliamente, con una expresión notable en el testículo, y sufre splicing alternativo. Las modificaciones postraduccionales incluyen fosforilación.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno corresponde a la región N-terminal (aminoácidos 1-230) de ATG4D humano. Al trabajar con muestras, considere que esta región puede estar conservada entre isoformas o especies, y valide los patrones de bandas en consecuencia.
• Para el western blot (WB), el peso molecular predicho es aproximadamente 53 kDa, pero ATG4D endógeno puede sufrir procesamiento proteolítico o modificación; valide los tamaños de las bandas utilizando controles positivos apropiados y lisados de células humanas o de ratón.
• En inmunofluorescencia/inmunocitoquímica (IF/ICC), evalúe los patrones de tinción citoplasmática y mitocondrial. Puede ser necesario optimizar las condiciones de fijación y permeabilización para detectar ATG4D localizado en mitocondrias.
• Para aplicaciones de ELISA, el anticuerpo puede usarse para la detección de ATG4D recombinante o endógeno; establezca curvas estándar con concentraciones conocidas de antígeno y considere la reactividad cruzada con miembros relacionados de la familia ATG4 si se realiza multiplexación.

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