Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-ATP7B para WB, IHC-P, ELISA - P35670

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de ATP7B

• Identidad de la proteína: ATP7B, también conocida como ATPasa transportadora de cobre 2 o proteína asociada a la enfermedad de Wilson, es una ATPasa de tipo P transportadora de cobre codificada por el gen ATP7B (GeneID 540). Pertenece a la subfamilia P1B de ATPasas transportadoras de metales pesados.
• Función principal: ATP7B media la exportación de cobre dependiente de ATP desde las células, crucial para mantener la homeostasis del cobre. En los hepatocitos, facilita la salida de cobre hacia la bilis, especialmente bajo niveles elevados de cobre intracelular, evitando así la acumulación tóxica.
• Localización subcelular: En condiciones basales de cobre, ATP7B reside predominantemente en la membrana de la red trans-Golgi (TGN), donde suministra cobre a las cuproenzimas. Ante una sobrecarga de cobre, se transloca a vesículas citoplasmáticas y a la membrana plasmática, así como a endosomas tardíos y mitocondrias, para exportar el exceso de cobre.
• Expresión tisular: ATP7B es más abundante en el hígado y el riñón, con una expresión más baja en el cerebro. También se detectan una isoforma específica del cerebro (isoforma 2) y una forma escindida proteolíticamente de 140 kDa (WND/140 kDa).
• Modificaciones postraduccionales y regulación: La proteína sufre fosforilación y empalme alternativo, y un evento de cambio de marco ribosomal puede generar variantes adicionales. Estas modificaciones influyen en su tráfico y actividad catalítica.
• Relevancia clínica: Las mutaciones en ATP7B causan la enfermedad de Wilson (WD), un trastorno autosómico recesivo caracterizado por la acumulación de cobre en el hígado y el cerebro, lo que conduce a síntomas hepáticos y neurológicos. El anticuerpo se dirige a una región cercana al extremo C-terminal (aa 1251-1351), que puede detectar las formas de longitud completa y las escindidas.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Diseño del inmunógeno: El inmunógeno abarca los aminoácidos 1251–1351 en la región C-terminal, que está bien conservada entre especies (lo que explica la reactividad cruzada con ratón y rata). Esta región se predice que es citoplasmática según los modelos de topología, lo que potencialmente genera anticuerpos que reconocen tanto los fragmentos de longitud completa como los C-terminales.
• Western blotting: El peso molecular predicho de ATP7B es de ~157 kDa. Utilice un gel de bajo porcentaje (por ejemplo, 6–8%) y asegure condiciones de transferencia adecuadas (por ejemplo, transferencia húmeda con reducción de metanol) para proteínas de alto peso molecular. El anticuerpo también puede detectar la forma escindida de 140 kDa (WND/140) en hígado o líneas celulares.
• IHC-P: Optimice la recuperación antigénica (por ejemplo, con tampón citrato o EDTA mediado por calor) e incluya controles apropiados (por ejemplo, tejido hepático como positivo, control de isotipo). La tinción en hepatocitos debe localizarse en la TGN y mostrar redistribución bajo desafío de cobre.
• ELISA: El inmunógeno recombinante puede servir como estándar para ensayos cuantitativos. Valide la linealidad y sensibilidad utilizando lisados cargados con cobre o que sobreexpresen ATP7B.

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