Anticuerpo policlonal de conejo anti-AUH para WB, ELISA - Q13825

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de AUH

• AUH codifica la metilglutaconil-CoA hidratasa, una enzima mitocondrial también conocida como enoil-CoA hidratasa de unión a ARN específica de AU. Desempeña un doble papel en el catabolismo de la leucina y el metabolismo del ARN.
• Cataliza la hidratación de 3-metilglutaconil-CoA a 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA) en la vía de degradación de la leucina, un paso clave para la producción de cuerpos cetónicos (PubMed:11738050, 12434311, 12655555, 16640564).
  Referencias relacionadas:
  PMID:11738050 PMID:12434311 PMID:12655555 PMID:16640564
• Exhibe una especificidad de sustrato más amplia in vitro, incluyendo glutaconil-CoA, crotonil-CoA y 3-metilcrotonil-CoA, aunque con menor afinidad (PubMed:16640564).
  Referencias relacionadas:
  PMID:16640564
• Se une a elementos ricos en AU (AREs) en el ARNm, lo que sugiere un papel en la regulación de la estabilidad y degradación del ARNm (PubMed:7892223).
  Referencias relacionadas:
  PMID:7892223
• Puede funcionar como una itaconil-CoA hidratasa en la vía de catabolismo de dicarboxilatos C5, desintoxicando el metabolito antimicrobiano itaconato producido por los macrófagos (PubMed:29056341).
  Referencias relacionadas:
  PMID:29056341
• Se localiza predominantemente en la matriz mitocondrial, en consonancia con sus funciones metabólicas.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen acetilación, y la proteína sufre un empalme alternativo, lo que añade diversidad funcional.
• Las variantes genéticas de AUH se asocian con enfermedades, lo que destaca su importancia clínica.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno utilizado corresponde a los aminoácidos 68–339 de la AUH humana, cubriendo una gran parte de la proteína madura. Esto puede favorecer el reconocimiento de conformaciones tanto nativas como desnaturalizadas en diversas aplicaciones.
• Para Western blot, se espera una banda alrededor de 36 kDa (o 35.6 kDa según UniProt). Utilice lisados enriquecidos en mitocondrias o líneas celulares con expresión confirmada de AUH como controles positivos para verificar la especificidad de la banda.
• En ELISA, el recubrimiento directo con proteína AUH recombinante o el fragmento del inmunógeno puede servir como estrategia de captura. Considere emparejarlo con un anticuerpo de detección que reconozca un epítopo distinto para el desarrollo de ELISA tipo sándwich.
• Para confirmar la especificidad del objetivo, se recomienda la eliminación mediada por siRNA o el knockout con CRISPR de AUH en líneas celulares relevantes para observar la pérdida de señal en WB.
• Dada la alta homología de secuencia entre la AUH humana, de ratón y de rata, el anticuerpo puede reaccionar de forma cruzada con estas especies. Valide siempre la reactividad en muestras derivadas de la especie apropiada si trabaja con sistemas no humanos.

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