Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-CAD para WB, IF/ICC, ELISA - P27708

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de CAD

• CAD es una gran enzima multifuncional que codifica las tres primeras actividades de la vía de biosíntesis de novo de pirimidinas: carbamoil fosfato sintetasa (CPSasa), aspartato transcarbamilasa (ATCase) y dihidroorotasa (DHOasa).
• La actividad de CPSasa incluye un dominio de amidotransferasa dependiente de glutamina (GATasa) que genera amoníaco, que luego es utilizado por el dominio de la sintetasa para producir carbamoil fosfato a partir de ATP y bicarbonato.
• El carbamoil fosfato producido se dirige al sitio activo de la ATCasa, que cataliza la formación de carbamoil-L-aspartato a partir de L-aspartato.
• Finalmente, el dominio DHOasa cicliza el carbamoil aspartato para formar dihidroorotato, el precursor para la síntesis de UMP.
• CAD se localiza tanto en el citoplasma como en el núcleo.
• Las modificaciones postraduccionales de CAD incluyen acetilación y fosforilación, que regulan su actividad y el flujo de la vía.
• Las mutaciones en el gen CAD están asociadas a trastornos congénitos de glicosilación (CDG1Z) y a la encefalopatía epiléptica del desarrollo (DEE50, EIEE50).
• La proteína tiene un peso molecular de aproximadamente 243 kDa y contiene múltiples dominios con sitios de unión para ATP, iones metálicos (magnesio, manganeso, zinc) y nucleótidos.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético correspondiente a la región N-terminal (aa 1–100) de la CAD humana, que probablemente se dirige al dominio GATasa. Verifique la especificidad en los modelos celulares relevantes.
• Para la detección por western blot de la proteína de 243 kDa, utilice un gel de poliacrilamida de bajo porcentaje (por ejemplo, 6–8%) y tiempos de transferencia prolongados para garantizar una transferencia eficiente.
• En IF/ICC, considere la fijación con PFA al 4% y la permeabilización con Tritón X-100 al 0,1% para detectar tanto las fracciones citoplasmáticas como nucleares.
• Para ELISA, el anticuerpo se puede aplicar en formatos directos o sándwich; incluya el péptido inmunógeno como control positivo.
• La expresión endógena de CAD varía entre los tipos de células; valide el anticuerpo en su sistema experimental, como las células HeLa o HEK293.
• No se ha determinado la reactividad cruzada con especies distintas a la humana; realice una alineación de secuencias si prueba muestras no humanas.

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