Anticuerpo monoclonal de conejo anti-Cas9 para WB y ELISA - Q99ZW2

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de Cas9

• Cas9 (endonucleasa Cas9/Csn1 asociada a CRISPR) es una endonucleasa de ADN guiada por ARN que actúa como proteína efectora del sistema inmune adaptativo CRISPR-Cas de tipo II en Streptococcus pyogenes.
  Referencias relacionadas: PMID:21455174
• En la vía de interferencia CRISPR, Cas9 forma un complejo con un ARN CRISPR (crARN) y un crARN trans-activador (tracrARN). Este complejo guiado por ARN doble reconoce y corta objetivos de ADN de doble hebra complementarios a la secuencia espaciadora del crARN.
• El reconocimiento y corte del objetivo requiere una secuencia corta denominada motivo adyacente al protoespaciador (PAM, por sus siglas en inglés) (5'-NGG-3' para SpCas9) inmediatamente aguas abajo del sitio objetivo. El reconocimiento del PAM es esencial para la actividad catalítica y ayuda a distinguir el ADN propio del no propio.
  Referencias relacionadas: PMID:24476820
• Además del corte de ADN, Cas9 también participa en la maduración de los crARN. Junto con el tracrARN y la ribonucleasa III del hospedero, estabiliza el dúplex pre-crARN:tracrARN para un procesamiento correcto, aunque la propia Cas9 no tiene un papel catalítico en el corte de ARN.
  Referencias relacionadas: PMID:24270795
• Cas9 es una proteína multidominio con actividades de unión a ADN, endonucleasa y exonucleasa. Depende de iones metálicos divalentes como magnesio o manganeso para sus funciones nucleolíticas.
• Estructuralmente caracterizada a alta resolución, Cas9 presenta flexibilidad conformacional que le permite cumplir sus funciones de unión a ARN, desenrollamiento de ADN y corte coordinado por sus dos dominios nucleasas (RuvC y HNH).
• El peso molecular nativo de Cas9 es de aproximadamente 158 kDa, coherente con su gran arquitectura multidominio.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno comprende los aminoácidos 450–730 de la Cas9 de Streptococcus pyogenes, una región que incluye porciones del dominio nucleasa RuvC. Tenga en cuenta que el anticuerpo puede reconocer tanto la proteína Cas9 nativa como la desnaturalizada.
• Para Western Blot, el peso molecular predicho de la Cas9 de longitud completa es de ~158 kDa; valide la reactividad en el sistema de muestra correspondiente (por ejemplo, lisados de S. pyogenes o líneas celulares modificadas que expresen SpCas9).
• Al desarrollar un ELISA, evalúe el rendimiento del anticuerpo frente a la proteína Cas9 recombinante o extractos celulares. La reactividad cruzada indicada (Humana, Otra) sugiere un potencial para aplicaciones que involucren líneas celulares humanas o tejidos que expresen Cas9 exógena.

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