Anticuerpo policlonal de conejo anti-CD4 para WB, IF/ICC, IF-P, ELISA - P01730

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de CD4

• CD4 es una glucoproteína integral de membrana de 51 kDa, también conocida como antígeno de superficie de las células T T4/Leu-3, perteneciente a la superfamilia de las inmunoglobulinas. Contiene cuatro dominios extracelulares similares a las Ig (D1–D4), una única hélice transmembrana y una cola citoplasmática que interactúa con la cinasa Src LCK.
• En las células T colaboradoras, CD4 funciona como correceptor de las moléculas del MHC de clase II. Se une simultáneamente al receptor de células T (TCR) y al MHC de clase II en las células presentadoras de antígeno, reclutando LCK para fosforilar sustratos del complejo TCR-CD3, lo que inicia cascadas de señalización que conducen a la activación de las células T, la producción de linfocinas y la proliferación.
• CD4 es fundamental para el desarrollo de los timocitos y la diferenciación de las células T colaboradoras. También desencadena la maduración de monocitos a macrófagos, lo que subraya su función en la inmunidad innata y adaptativa.
• Además de las células T, CD4 se expresa en macrófagos, células dendríticas y células NK, donde modula la diferenciación, la expresión de citocinas y la migración celular mediante vías independientes de TCR/LCK.
• CD4 actúa como el receptor principal del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) a través de su dominio D1, facilitando la entrada viral. También es un receptor del herpesvirus humano 7 (HHV-7). La infección por VIH-1 provoca una disminución de la expresión de CD4 por acción de la proteína viral Vpu. Referencias relacionadas: PMID:12089508, PMID:16331979, PMID:2214026, PMID:17346169, PMID:7909607
• La localización subcelular es predominantemente la membrana celular, en consonancia con su función como receptor de superficie. Puede liberarse una forma soluble tras la activación de las células T.
• Se expresa en gran medida en las células T colaboradoras, pero también se encuentra en otras células inmunitarias, como macrófagos, células dendríticas y células NK. La expresión de CD4 es un marcador definitorio para la identificación de las células T colaboradoras.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen glucosilación ligada a N, enlaces disulfuro dentro de los dominios de Ig y palmitoilación en la cola citoplasmática, lo que puede modular la localización en microdominios de membrana y la señalización.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca el dominio extracelular (aa 26‑200) de CD4 humano, cubriendo los sitios de unión al MHC de clase II y al gp120 del VIH-1. Este diseño puede permitir la detección de CD4 de longitud completa tanto en transferencias Western desnaturalizantes como en conformaciones nativas mediante inmunofluorescencia y ELISA.
• Para la transferencia Western, se espera una banda de aproximadamente 51 kDa en condiciones reductoras. La glucosilación puede hacer que el peso molecular aparente sea mayor (55–60 kDa). Incluya controles positivos adecuados (por ejemplo, lisados de Jurkat o de PBMC humanas) y considere el uso de un agente reductor.
• La reactividad cruzada descrita con CD4 de ratón y rata debe verificarse en sus modelos experimentales específicos. La alineación de secuencias muestra aproximadamente un 70 % de identidad en la región extracelular; se recomienda titular el anticuerpo primario y realizar una validación cuidadosa.
• El anticuerpo puede utilizarse en formatos de inmunofluorescencia indirecta (IF/ICC) y ELISA. Asegure protocolos adecuados de fijación y permeabilización para IF; para la tinción de la superficie celular, evite la permeabilización. Valide el anticuerpo en el tipo celular o tejido pertinente.
• Al utilizarlo en estudios funcionales (por ejemplo, para bloquear la unión del VIH-1), tenga en cuenta que su naturaleza policlonal puede producir resultados variables; para un bloqueo específico del epítopo y más consistente, pueden preferirse los formatos monoclonales.

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