Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-CD44 (Validado por KO) para WB, IHC-P, IF/ICC, FC, ELISA - P16070

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de CD44

• CD44 es una proteína de membrana de tipo I de un solo paso que actúa como el receptor principal del hialuronano (HA) y también interactúa con colágeno, factores de crecimiento, citoquinas y proteasas, lo que permite a las células detectar y responder a los cambios del microentorno tisular. Referencias relacionadas: PMID:16541107, PMID:19703720, PMID:22726066, PMID:18757307, PMID:23589287
• CD44 media la activación, el direccionamiento y la recirculación de linfocitos, así como la hematopoyesis y las respuestas inflamatorias a infecciones bacterianas. Referencias relacionadas: PMID:7528188
• La señalización intracelular de CD44 implica el ensamblaje de complejos proteicos con quinasas receptoras y proteasas de membrana, lo que conduce a la activación de PKN2, RAC1, RHOA y fosfolipasa C, que promueven la reorganización del citoesqueleto y la movilización de calcio. Referencias relacionadas: PMID:18757307, PMID:23589287, PMID:15123640
• La proteína se localiza principalmente en la membrana plasmática y los microvellosidades, pero un ectodominio soluble puede desprenderse hacia el espacio extracelular.
• El empalme alternativo genera múltiples isoformas; la isoforma epitelial 10 (CD44v) se expresa altamente en carcinomas, mientras que las células de neuroblastoma reprimen su expresión.
• A nivel proteico, CD44 se detecta en fibroblastos, orina y placenta. Referencias relacionadas: PMID:25326458, PMID:36213313, PMID:37453717, PMID:32337544
• La proteína está muy modificada por glicosilación, fosforilación y adición de proteoglucanos, y presenta enlaces disulfuro; también participa en la internalización del virus de la fiebre aftosa.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca el dominio N-terminal de unión al hialuronano (aa 20–178), que está conservado y expuesto en la superficie; por lo tanto, este anticuerpo puede detectar múltiples isoformas de CD44 y conformaciones nativas en aplicaciones como WB e IF/ICC.
• Para Western blotting, el peso molecular previsto es de ~82 kDa, pero una glicosilación extensa puede causar un patrón de bandas difuso o en forma de escalera; considere el pretratamiento con PNGasa F u otras desglicosilasas para confirmar la especificidad.
• En inmunohistoquímica e inmunofluorescencia, valide la especificidad utilizando líneas celulares/tejidos control con silenciamiento o eliminación (knockout) de CD44 para confirmar los patrones de tinción.
• Para citometría de flujo, optimice la titulación del anticuerpo e incluya controles de isotipo para cuantificar con precisión la expresión de CD44 en subpoblaciones de linfocitos, células de carcinoma u otras poblaciones relevantes.
• Dado el desprendimiento del ectodominio de CD44, la preparación de muestras para ensayos basados en ELISA debe considerar si se desea detectar CD44 soluble total o isoformas específicas; incluya estándares adecuados y pasos de bloqueo.

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