Anticuerpo monoclonal de conejo anti-CD64 para WB, ELISA - P12314

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de CD64

• CD64, también conocido como FcγRI, es el receptor de alta afinidad para la región Fc de la inmunoglobulina gamma (IgG). Está codificado por el gen FCGR1A en humanos y pertenece a la superfamilia de las inmunoglobulinas.
• Este receptor desempeña un papel fundamental en la conexión entre la inmunidad humoral y celular al unirse a la IgG con alta afinidad, lo que permite a los monocitos y macrófagos reconocer y eliminar objetivos opsonizados con IgG.
• CD64 media potentes funciones efectoras, incluida la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) contra células infectadas por virus, contribuyendo así a las respuestas inmunitarias antivirales.
• La proteína está compuesta por tres dominios extracelulares similares a inmunoglobulinas, una única hélice transmembrana y una cola citoplasmática corta. El inmunógeno utilizado corresponde a la región extracelular (aminoácidos 16–288), que abarca los dominios de unión a IgG.
• CD64 se expresa específicamente en la superficie de monocitos y macrófagos, en consonancia con su función en la vigilancia inmunitaria innata y la presentación de antígenos.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen la glucosilación ligada a N y la fosforilación. El intervalo de peso molecular observado (45–75 kDa) refleja la heterogeneidad de la glucosilación.
• El corte y empalme alternativo genera múltiples isoformas, algunas de las cuales pueden secretarse o funcionar como receptores solubles.
• Como receptor clave de la inmunidad innata y desencadenante de la ADCC, CD64 es un biomarcador validado de la activación de monocitos/macrófagos y una diana terapéutica en la inmunoterapia contra el cáncer.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es una proteína recombinante que cubre todo el dominio extracelular (aa 16–288), lo que sugiere que este anticuerpo probablemente reconoce tanto la conformación nativa como los epítopos desnaturalizados. En Western blot, el patrón de bandas observado puede aparecer como una banda ancha o múltiples bandas entre 45 y 75 kDa debido a la glucosilación variable; utilice una carga adecuada de proteína y condiciones reductoras.
• Para ELISA, considere utilizar proteína FcγRI recombinante o lisados celulares de líneas celulares monocíticas humanas (por ejemplo, THP-1) como fuente de antígeno. Valide la especificidad del ensayo mediante controles de isotipo y bloqueo con un exceso de IgG humana.
• Dado que la expresión de CD64 está restringida a monocitos/macrófagos, asegúrese de que las muestras de tejido o células estén enriquecidas en esta población para obtener señales sólidas. En preparaciones mixtas de leucocitos, la tinción conjunta con CD14 puede ayudar a confirmar la identidad de los monocitos.
• Se espera que el anticuerpo presente reactividad cruzada con CD64 humano, pero no con otros receptores Fcγ (CD32, CD16). Si se necesita una reactividad más amplia, evalúe proteínas recombinantes de diferentes miembros de la familia FcγR.
• Dado su papel en la ADCC, este anticuerpo puede ser útil en ensayos funcionales que monitoricen la eliminación mediada por monocitos; no obstante, sus propiedades bloqueadoras o activadoras deben determinarse experimentalmente.

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