Anticuerpo monoclonal de conejo anti-CD68 para WB, IF-P, FC (intra), ELISA - P34810

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de CD68

• CD68, también conocido como macrosialina, GP110, LAMP4 y SCARD1, es una proteína transmembrana tipo I fuertemente glicosilada que pertenece a la familia de proteínas asociadas a membrana de lisosoma (LAMP).
• Se localiza predominantemente en las membranas de endosomas y lisosomas, pero puede reciclarse a la superficie celular, permitiendo una presentación rápida en la membrana plasmática de los macrófagos.
• La proteína juega un papel crítico en la fagocitosis, mediando el metabolismo lisosomal intracelular del material engullido y participando en interacciones extracelulares con patógenos y otras células.
• CD68 se une a lectinas o selectinas específicas de tejidos y órganos, lo que facilita la migración dirigida de subconjuntos de macrófagos a sitios anatómicos particulares y favorece la adhesión y migración de macrófagos.
• Se cree que el reciclaje rápido de CD68 desde endosomas y lisosomas a la membrana plasmática ayuda a los macrófagos a desplazarse sobre sustratos u otras células que portan selectinas.
• Aunque se expresa fuertemente en monocitos sanguíneos y macrófagos tisulares, CD68 también se detecta en linfocitos, fibroblastos, células endoteliales y muchas líneas celulares tumorales, donde puede promover la diseminación de células tumorales al unirse a selectinas vasculares.
• La proteína presenta múltiples dominios similares a mucina en su extremo N-terminal, una única hélice transmembrana y una cola citoplasmática corta, con extensa glicosilación N y O y varios enlaces disulfuro intramoleculares.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético que abarca los residuos 100–200 del CD68 humano (NP_001242.2). La conservación de secuencia en esta región probablemente subyace a la reactividad cruzada con ratón y rata.
• Para Western blot (WB), el peso molecular predicho del esqueleto no glicosilado es de ~37 kDa, pero las formas fuertemente glicosiladas suelen migrar a pesos moleculares aparentes más altos (80–110 kDa). Se recomienda un bloqueo apropiado y el uso de marcadores de peso molecular.
• En inmunofluorescencia (IF-P) y citometría de flujo intracelular (FC), la permeabilización es esencial porque CD68 reside principalmente en compartimentos endosomales y lisosomales; la tinción de superficie requiere considerar la dinámica de reciclaje.
• El rendimiento en ELISA depende de la accesibilidad del epítopo; los efectos de matriz y las condiciones de recubrimiento deben optimizarse, ya que la fuerte glicosilación puede enmascarar o alterar la unión del anticuerpo.
• Dada la amplia expresión en linajes de monocitos/macrófagos, se recomienda incluir controles positivos relevantes (por ejemplo, células THP-1 o RAW 264.7) y controles de isotipo para confirmar la especificidad en el sistema de muestra deseado.

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