Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-CD68 para WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P34810

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización del CD68

• El CD68, también conocido como macrosialina, GP110, LAMP4 o SCARD1, es una proteína transmembrana de tipo I fuertemente glicosilada que pertenece a la familia de glucoproteínas de membrana asociadas a lisosomas/endosomas (LAMP). Contiene un dominio tipo mucina y una hélice transmembrana.
• El splicing alternativo del gen CD68 genera múltiples isoformas, lo que puede contribuir a la diversidad funcional en diferentes tipos de células o compartimentos celulares.
• El CD68 desempeña un papel fundamental en las actividades fagocíticas de los macrófagos tisulares, participando tanto en el metabolismo lisosomal intracelular como en las interacciones célula-célula y célula-patógeno extracelulares. Se une a lectinas o selectinas específicas de tejidos y órganos, facilitando así la localización de subconjuntos de macrófagos en sitios particulares.
• La proteína sufre un reciclaje rápido entre endosomas, lisosomas y la membrana celular, un proceso dinámico que puede permitir a los macrófagos desplazarse sobre sustratos que portan selectinas u otras células.
• A nivel subcelular, el CD68 se localiza principalmente en la membrana celular, la membrana endosomal y la membrana lisosomal, lo que es coherente con sus funciones en el tráfico vesicular y la adhesión superficial.
• El CD68 se expresa altamente en monocitos de sangre y macrófagos tisulares. También se encuentra, en menor medida, en linfocitos, fibroblastos, células endoteliales y numerosas líneas celulares tumorales. En tumores, la expresión de CD68 puede promover la adhesión mediada por selectinas al endotelio vascular, ayudando potencialmente a la diseminación metastásica.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen una glicosilación extensa N y O, lo que explica que el peso molecular aparente de la proteína sea mayor que los 37 kDa predichos en SDS-PAGE. La proteína también contiene puentes disulfuro y un péptido señal.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno utilizado es un péptido sintético (aa 100‑200 del CD68 humano), lo que sugiere que el anticuerpo reconoce un epítopo lineal. Para la transferencia Western (western blotting), las condiciones reductoras y desnaturalizantes estándar deberían ser adecuadas; sin embargo, debido a la fuerte glicosilación, la banda observada puede migrar por encima de los 37 kDa predichos. Considere el uso de enzimas desglicosilantes para confirmar la especificidad si es necesario.
• Para inmunofluorescencia en secciones incluidas en parafina (IF‑P) e inmunohistoquímica (IHC‑P), se recomienda la recuperación de antígeno porque el CD68 es una proteína de membrana a menudo localizada en compartimentos intracelulares. Optimice la fijación (p. ej., PFA al 4% o formol) y la permeabilización para garantizar el acceso al epítopo en endosomas/lisosomas.
• Al utilizar este anticuerpo en ELISA, valide el rendimiento frente a la proteína CD68 recombinante o lisados de líneas celulares que expresan CD68 (p. ej., monocitos/macrófagos THP‑1) para confirmar la sensibilidad y especificidad.
• Dado que el CD68 es un marcador de macrófagos, incluya controles positivos apropiados (p. ej., lisados de macrófagos humanos) y negativos (p. ej., muestras con CD68 knockout o controles de isotipo) en todos los experimentos para verificar la especificidad del objetivo.

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