Anticuerpo policlonal anti-CD8A para WB, IHC-P, ELISA - P01732

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de CD8A

• CD8A codifica la cadena alfa de la glucoproteína de superficie de las células T CD8, también conocida como T8/Leu-2, que actúa como correceptor de las moléculas del MHC de clase I. La proteína CD8 existe como un heterodímero unido por disulfuro formado por las cadenas alfa/CD8A y beta/CD8B, o, con menor frecuencia, como un homodímero de CD8A.
• CD8A es esencial para la respuesta inmunitaria. En las células T, interactúa con el receptor de células T (TCR) y los complejos MHC de clase I:péptido presentes en las células presentadoras de antígenos, reclutando la tirosina cinasa Src LCK para iniciar vías de señalización que conducen a la activación, proliferación y diferenciación de las células T en linfocitos T citotóxicos (CTL).
• CD8A permite que los CTL reconozcan y eliminen células infectadas y tumorales. La cascada de señalización intracelular desencadenada por la fosforilación de CD8A-LCK promueve la producción de linfocinas, la motilidad, la adhesión y la lisis de las células diana.
• En las células asesinas naturales (NK), los homodímeros de CD8A proporcionan un mecanismo de supervivencia que facilita la conjugación con múltiples células diana y su lisis. Los homodímeros de CD8A también favorecen la supervivencia y diferenciación de los linfocitos activados en células T CD8+ de memoria.
• CD8A se expresa en células T derivadas del timo, un subconjunto de células NK, células T de memoria, linfocitos intraepiteliales, monocitos y células dendríticas. Su expresión puede inducirse en células dendríticas plasmacitoides tras la estimulación con el virus del herpes simple-1.
• La proteína es una glucoproteína integral de membrana con un dominio transmembrana de paso único y una forma secretada producida mediante corte y empalme alternativo. Contiene un dominio similar a una inmunoglobulina y se modifica mediante enlaces disulfuro, palmitoilación y glucosilación ligada a N.
• Entre las palabras clave asociadas con CD8A se incluyen inmunidad adaptativa, corte y empalme alternativo, membrana celular, variante de enfermedad (que implica su participación en la inmunodeficiencia), enlace disulfuro, glucoproteína, dominio de inmunoglobulina, lipoproteína, palmitato, secretada y hélice transmembrana.
• El peso molecular de la proteína madura es aproximadamente de 25,7 kDa, en consonancia con el tamaño de banda observado de 26 kDa en condiciones reductoras mediante análisis de Western blot.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno utilizado para generar este anticuerpo policlonal corresponde a los aminoácidos 22-182 de CD8A humano, que abarcan el dominio extracelular similar a una inmunoglobulina. Es muy probable que esta región sea accesible en la superficie celular, lo que hace que el anticuerpo sea adecuado para aplicaciones que reconocen la proteína nativa.
• Para Western blot (WB), se espera una banda de aproximadamente 26 kDa. El anticuerpo puede detectar tanto las formas glucosiladas como las no glucosiladas. Se recomiendan condiciones reductoras para resolver el monómero.
• Para la inmunohistoquímica en cortes incluidos en parafina (IHC-P), las condiciones óptimas de recuperación antigénica (por ejemplo, tampón de citrato, pH 6,0) deben determinarse empíricamente. La naturaleza policlonal puede proporcionar una fuerte amplificación de la señal, pero también podría aumentar el fondo; deben optimizarse las etapas de bloqueo.
• Como anticuerpo policlonal, reconoce múltiples epítopos, lo que puede ser ventajoso para los ensayos ELISA, ya que potencialmente puede utilizarse tanto como reactivo de captura como de detección. La adsorción cruzada frente a proteínas de ratón garantiza la reactividad con CD8A de ratón, ampliando su utilidad en estudios con modelos murinos.

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