Anticuerpo Policlonal Anti-Chk1 para WB, ELISA - O14757

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de Chk1

• Chk1 (Quinasa del punto de control 1) es una quinasa serina/treonina-proteína y miembro de la superfamilia de quinasas de proteínas, con un dominio quinasa conservado y un bolsillo de unión a ATP.
• Es necesaria para la detención del ciclo celular mediada por puntos de control y la activación de la reparación del ADN en respuesta a daño en el ADN o ADN no replicado, reconociendo la secuencia consenso del sustrato [R-X-X-S/T]. Referencias relacionadas: PMID:11535615 PMID:12399544 PMID:12446774
• Chk1 fosforila las fosfatasas CDC25 (CDC25A, CDC25B, CDC25C), creando sitios de unión para 14-3-3 y promoviendo la proteólisis de CDC25A, inhibiendo así los complejos CDK-ciclina y bloqueando la progresión del ciclo celular. Referencias relacionadas: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511 PMID:19734889 PMID:20090422
• La fosforilación de TP53 en múltiples sitios del extremo C-terminal por Chk1 promueve su acetilación y activación, conduciendo a la detención del ciclo celular y supresión de la proliferación. Referencias relacionadas: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Chk1 desempeña roles directos en la reparación del ADN al fosforilar RAD51 en Thr-309 (mejorando la recombinación homóloga), FANCE (facilitando la reparación de entrecruzamientos de ADN) y regulando el mantenimiento de la horquilla de replicación a través de PCNA. Referencias relacionadas: PMID:15665856 PMID:17296736 PMID:18451105
• Chk1 modula la cromatina mediante la fosforilación de TLK1 en Ser-743, evitando la fosforilación de ASF1A y potenciando potencialmente el ensamblaje de la cromatina, y mediante la fosforilación de la histona H3.1 en Thr11 para regular la transcripción génica. Referencias relacionadas: PMID:12660173 PMID:12955071
• Un isoforma de CHEK1 generada por empalme alternativo actúa como un represor endógeno de la Chk1 de longitud completa, promoviendo la transición de la fase S a G2/M a través de la interacción directa y antagonismo.
• Chk1 se localiza en el núcleo, cromosomas, citoplasma y centrosomas. Se expresa de forma ubicua con los niveles más altos en timo, testículo, intestino delgado y colon.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Para Western blotting, utilice condiciones reductoras y prepare lisados de células o tejidos que se sepa expresan Chk1, como timo o testículo. El peso molecular predicho es ~54 kDa; sin embargo, las modificaciones postraduccionales pueden causar desplazamientos aparentes.
• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 148-307 de la Chk1 humana, que se encuentra dentro del dominio quinasa. Si bien esta región está altamente conservada en la isoforma canónica, se recomienda la validación con controles apropiados para evaluar la reactividad con posibles isoformas alternativas.
• Este anticuerpo policlonal de conejo está validado para ELISA y WB. Para aplicaciones de ELISA, considere usar proteína o fragmento recombinante de Chk1 como estándar, y optimice la dilución del anticuerpo y las condiciones de bloqueo para su formato de ensayo específico.
• Como anticuerpo policlonal, es posible la variabilidad entre lotes. Recomendamos validar el rendimiento en su sistema experimental e incluir controles positivos y negativos apropiados.

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