Anticuerpo monoclonal de conejo anti-Chk1 para WB, IHC-P, ELISA - O14757

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de Chk1

• Codificada por el gen CHEK1, la quinasa de serina/treonina Chk1 experimenta un corte y empalme alternativo que produce múltiples isoformas, incluida una isoforma represora endógena que antagoniza a la Chk1 de longitud completa para promover la transición de la fase S a la fase G2/M.
• Funciona como una quinasa de punto de control crítica, necesaria para la detención del ciclo celular y la activación de la reparación del ADN en respuesta al daño del ADN o a ADN no replicado, mediante el reconocimiento de la secuencia consenso del sustrato [R-X-X-S/T]. Referencias relacionadas: PMID:11535615 PMID:12399544 PMID:12446774
• Fosforila CDC25A, CDC25B y CDC25C, creando sitios de unión para 14-3-3 o preparándolas para la poliubiquitinación y degradación mediadas por NEK11, inhibiendo así los complejos CDK-ciclina y bloqueando la progresión del ciclo celular. Referencias relacionadas: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511 PMID:19734889 PMID:20090422
• Mejora la reparación del ADN mediante recombinación homóloga a través de la fosforilación de RAD51 en Thr-309, promoviendo la liberación de RAD51 de BRCA2 y aumentando su asociación con la cromatina. Referencias relacionadas: PMID:15665856
• Fosforila el extremo C-terminal de TP53, potenciando su acetilación y actividad transcripcional para promover la detención del ciclo celular y suprimir la proliferación. Referencias relacionadas: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Modula la estructura de la cromatina y la expresión génica mediante la fosforilación de la histona H3.1 en Thr-11 (H3T11ph), lo que conduce al silenciamiento epigenético de un subconjunto de genes (por similitud).
• Se localiza en el núcleo, los cromosomas, el citoplasma y el centrosoma, lo que refleja sus múltiples funciones en el control del ciclo celular y el mantenimiento genómico.
• Se expresa ubicuamente, con niveles más altos en el timo, los testículos, el intestino delgado y el colon, tejidos con altas tasas de proliferación.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca los aminoácidos 1-100 del extremo N-terminal; considere confirmar la especificidad del epítopo mediante competencia con péptidos o mutantes de deleción en su sistema de ensayo.
• Para Western blot, el peso molecular esperado es de aproximadamente 54 kDa; utilice un gel de SDS-PAGE al 10 % y optimice las condiciones de transferencia para la detección de proteínas de alto peso molecular.
• En inmunohistoquímica (parafina), puede ser necesaria la recuperación antigénica con tampón de citrato (pH 6,0); incluya timo o testículo como tejidos de control positivo e IgG de conejo como control negativo de isotipo.
• Para ELISA, pueden evaluarse formatos directo o tipo sándwich; considere ensayos competitivos con el péptido inmunizante para validar la especificidad de unión.
• Este anticuerpo está validado para la reactividad humana; no se ha determinado la reactividad cruzada con otras especies, por lo que se recomienda una validación específica para cada especie si se amplía a otros modelos.

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