Anticuerpo monoclonal anti-PARP escindido (Asp214) para WB, IF/ICC, ELISA - P09874

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de PARP1

• PARP1 es una poli-ADP-ribosiltransferasa nuclear que media la poli-ADP-ribosilación de proteínas sustrato, desempeñando un papel central en la reparación del ADN, la remodelación de la cromatina y la estabilidad del genoma (PubMed:17177976, PubMed:18055453, PubMed:18172500). Referencias relacionadas: PMID:17177976 PMID:18055453 PMID:18172500
• Cataliza la ADP-ribosilación ligada a serina, glutamato y tirosina, con especificidad de residuo determinada por los cofactores HPF1 y NMNAT1 (PubMed:28190768, PubMed:32028527, PubMed:29954836). Referencias relacionadas: PMID:28190768 PMID:32028527 PMID:29954836
• En la reparación del ADN, PARP1 detecta roturas de cadena, recluta factores de reparación y promueve la relajación de la cromatina para facilitar la reparación por escisión de bases y de roturas de doble cadena (PubMed:26344098, PubMed:30356214, PubMed:19344625). Referencias relacionadas: PMID:26344098 PMID:30356214 PMID:19344625
• Durante la apoptosis, PARP1 es escindido por caspasa-3 y -7 en Asp214, generando un gran fragmento catalítico (∼89 kDa) que se transloca al citoplasma y sirve como portador de poli-ADP-ribosa, desencadenando la apoptosis mediada por AIFM1 (PubMed:33168626). Referencias relacionadas: PMID:33168626
• La localización subcelular es predominantemente nuclear y nucleolar en condiciones normales; tras la escisión, el fragmento catalítico se relocaliza al citoplasma.
• PARP1 sufre extensas modificaciones postraduccionales, incluyendo acetilación, ADP-ribosilación (automodificación), fosforilación y ubiquitinación, que regulan su actividad e interacciones.
• Más allá de la reparación del ADN, PARP1 funciona en la regulación de la transcripción, la progresión de la horquilla de replicación, la adipogénesis y la inmunidad innata mediante la modulación de actividades proteicas y la estructura de la cromatina (PubMed:15607977, PubMed:22464733, PubMed:35460603). Referencias relacionadas: PMID:15607977 PMID:22464733 PMID:35460603

Guía experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo se dirige al neoepítopo en Asp214; por lo tanto, detecta específicamente el fragmento de PARP escindido en lugar de PARP de longitud completa. Para western blot, trate las células con inductores de apoptosis (por ejemplo, estaurosporina o etopósido) para enriquecer el fragmento de ∼89 kDa.
• Para inmunofluorescencia/ICC, considere la fijación después de la inducción de apoptosis para observar la localización citosólica del fragmento escindido. Valide la especificidad de la tinción en su sistema experimental con controles apropiados.
• Se ha reportado la idoneidad para ELISA; al diseñar ensayos, considere usar fragmento de PARP escindido recombinante o péptido como estándar y optimice las condiciones de recubrimiento y detección.

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