Anticuerpo Policlonal Anti-CLOCK de Conejo para WB, ELISA - O15516

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de CLOCK

• CLOCK (Circadian Locomotor Output Cycles Protein Kaput), también conocido como bHLHe8, es un componente central del reloj circadiano molecular que impulsa ritmos de aproximadamente 24 horas en la expresión génica, el metabolismo y el comportamiento (UniProt O15516).
• Como el brazo positivo del bucle de retroalimentación transcripción/traducción, CLOCK forma un heterodímero con BMAL1 (o BMAL2) para unirse a elementos de caja E (5'-CACGTG-3') en los promotores de los genes del reloj central (PER1/2/3, CRY1/2) y genes controlados por el reloj, activando así la transcripción.
• El heterodímero CLOCK-BMAL1 reconoce preferentemente el motivo 5'-CACGTGA-3', donde CLOCK se une al sitio medio 5'-CAC-3' y BMAL1 al sitio medio 5'-GTGA-3'; también se reconocen motivos no canónicos 5'-AACGTGA-3' y 5'-CATGTGA-3'. Referencias relacionadas: PMID:23229515
• CLOCK posee actividad intrínseca de histona acetiltransferasa, permitiendo la remodelación circadiana de la cromatina al acetilar histonas (ej., H3, H4) y proteínas no histónicas, incluyendo la propia BMAL1; esta actividad es tan crítica como la transcripción para la generación del ritmo.
• Acetila la argininosuccinato sintasa 1 (ASS1) de manera circadiana, lo que conduce a la inhibición de la actividad enzimática y al control rítmico de la biosíntesis de arginina y la ureagénesis, vinculando así el reloj con el metabolismo. Referencias relacionadas: PMID:28985504
• CLOCK reprime la actividad transcripcional del receptor de glucocorticoides NR3C1/GR al acetilar múltiples residuos de lisina en la región bisagra del receptor, reduciendo su asociación con los elementos de respuesta a glucocorticoides. Referencias relacionadas: PMID:21980503
• Subcelularmente, CLOCK es principalmente nuclear pero también se detecta en el citoplasma y el citosol. Se expresa ampliamente, con los niveles más altos en testículo y músculo esquelético, y está muy enriquecido en el núcleo supraquiasmático (SCN) del cerebro, el reloj central.
• Modificaciones postraduccionales, incluyendo fosforilación, acetilación y ubiquitinación, ajustan finamente la estabilidad y actividad de CLOCK, contribuyendo al control oscilatorio preciso de los ritmos circadianos.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 450-600 de CLOCK humano, una región que puede garantizar el reconocimiento del dominio de acetiltransferasa y ayudar a detectar tanto la forma de longitud completa como posibles isoformas; considere verificar la reactividad en la especie y tejido relevantes.
• Para Western blot, el peso molecular predicho de CLOCK es de 95 kDa; sin embargo, las modificaciones postraduccionales (ej., fosforilación, acetilación) podrían desplazar la banda observada. Utilice tampones de bloqueo y detección apropiados optimizados para anticuerpos policlonales de conejo.
• Para ELISA, asegúrese de que la proteína recombinante o el péptido de recubrimiento coincida con la región del inmunógeno para maximizar la captura del anticuerpo. Titular el anticuerpo para determinar la concentración de trabajo óptima en su sistema de ensayo.
• Se reporta reactividad cruzada para humano, ratón y rata; valide en su organismo modelo de elección utilizando controles positivos y negativos. La expresión de CLOCK es circadiana, por lo tanto, considere el momento del día de la recolección al examinar los niveles endógenos.

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