Anticuerpo monoclonal de conejo anti-COX5B para WB - P10606

Especificaciones y parámetros principales del producto

Contexto biológico: función y localización de COX5B

• COX5B (subunidad 5B de la citocromo c oxidasa) es una subunidad codificada por el núcleo del complejo IV mitocondrial (citocromo c oxidasa), la enzima terminal de la cadena de transporte de electrones.
• Es un componente del complejo multisubunidad de la citocromo c oxidasa que cataliza la reducción del oxígeno molecular a agua, acoplando esta reacción al bombeo de protones a través de la membrana interna mitocondrial.
• La proteína COX5B se sintetiza con un péptido de tránsito mitocondrial, que se escinde después de su importación a la mitocondria, dando lugar a una subunidad madura que se integra en la membrana interna.
• La localización subcelular está restringida a la membrana interna mitocondrial, donde contribuye a la integridad estructural y funcional del complejo IV.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen la acetilación, y la proteína madura contiene un sitio de unión al zinc, como indica la presencia de un ion de zinc en la estructura cristalina.
• El peso molecular teórico de la COX5B humana madura es de aproximadamente 13,7 kDa, lo que coincide con la banda observada de 13 kDa en SDS-PAGE.
• Como subunidad central de la cadena respiratoria, COX5B es esencial para una fosforilación oxidativa y una producción de ATP eficientes, y su expresión se utiliza a menudo como marcador de la masa y la actividad mitocondriales.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca los aminoácidos 29–129 de la COX5B humana, que corresponden a la proteína madura procesada sin el péptido de direccionamiento mitocondrial, lo que probablemente genera anticuerpos que reconocen la forma procesada endógena.
• Para la transferencia Western, se espera una banda de aproximadamente 13 kDa en lisados de tejidos humanos, de ratón y de rata ricos en mitocondrias (por ejemplo, corazón, músculo esquelético e hígado). Utilice una muestra enriquecida en la fracción mitocondrial para una detección óptima.
• Para la inmunohistoquímica (IHC-P) y la inmunofluorescencia (IF/ICC), la tinción debería mostrar un patrón citoplasmático punteado compatible con la localización mitocondrial. Se recomienda la contratinción con un marcador mitocondrial para la validación.
• En los experimentos de inmunoprecipitación (IP), el anticuerpo puede coprecipitar otras subunidades del complejo IV; considere el uso de detergentes suaves para preservar la integridad del complejo nativo.
• La reactividad en ELISA puede utilizarse para la detección cuantitativa de COX5B en lisados celulares o tisulares, pero el rendimiento debe validarse con estándares conocidos.
• Se ha confirmado la reactividad cruzada con ratón y rata, pero verifique siempre la reactividad específica de la especie en su propio sistema experimental debido a posibles variaciones de secuencia.

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