Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-CTCF para WB, IF/ICC, IP, ELISA, ChIP, ChIP-seq, CUT&Tag - P49711

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de CTCF

• CTCF, también conocido como factor de unión CCCTC o proteína de 11 dedos de zinc, es un factor de unión a la cromatina que se une a sitios de ADN específicos de secuencia y regula la estructura 3D de la cromatina mediante la formación de bucles y el anclaje del ADN a estructuras nucleares. Referencias relacionadas: PMID:16949368, PMID:18347100, PMID:18654629
• Define los límites entre el ADN activo y la heterocromatina al unirse a aislantes de cromatina, impidiendo las interacciones entre promotores y potenciadores y silenciadores cercanos, mediando así el silenciamiento génico de largo alcance. Referencias relacionadas: PMID:18347100, PMID:18654629, PMID:19322193
• CTCF participa en la expresión génica específica del alelo en el locus impreso IGF2/H19, mediando la conformación de la cromatina de orden superior y restringiendo el acceso del potenciador a IGF2 en el alelo materno. Referencias relacionadas: PMID:16107875, PMID:16815976, PMID:17827499
• Juega un papel crítico en la inactivación del cromosoma X al establecer un interruptor epigenético regulable y evitar la propagación de la metilación estable en los genes de escape. Referencias relacionadas: PMID:11743158
• CTCF se localiza principalmente en el núcleo y se asocia con centrómeros y brazos cromosómicos durante la metafase, donde se requiere para la localización de la cohesina y la cohesión de las cromátidas hermanas. Referencias relacionadas: PMID:18550811, PMID:26321640
• Actúa como represor transcripcional de MYC y BAG1 y como activador transcripcional de APP, demostrando sus funciones regulatorias duales. Referencias relacionadas: PMID:8649389, PMID:9591631, PMID:9407128
• La proteína contiene múltiples sitios de modificación postraduccional, incluyendo acetilación, fosforilación y sumoilación (enlace isopeptídico), que regulan su unión a la cromatina y sus actividades transcripcionales.
• CTCF se expresa de manera ubicua en los tejidos humanos pero está notablemente ausente en los espermatocitos primarios, lo que indica roles regulatorios específicos del tejido.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno abarca los aminoácidos 628–727 en la región C-terminal del CTCF humano, un dominio distinto de la región de unión al ADN de dedos de zinc, lo que potencialmente mejora la especificidad del anticuerpo para el CTCF endógeno sobre otras proteínas de dedos de zinc.
• Para la transferencia Western (Western blotting), se predice una banda esperada a aproximadamente 83 kDa; la migración real puede diferir debido a modificaciones postraduccionales o condiciones del gel, por lo que se debe validar con un control positivo conocido.
• Para la inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) y ChIP-seq, optimice las condiciones de entrecruzamiento y cizalladura de la cromatina para su tipo celular; incluya regiones genómicas de control positivo (p. ej., H19 ICR) y negativo para evaluar el enriquecimiento.
• Al realizar inmunofluorescencia, los protocolos de fijación y permeabilización deben probarse empíricamente para garantizar una tinción nuclear robusta; se puede observar la localización subcelular en el núcleo y los centrómeros.
• El anticuerpo es adecuado para CUT&Tag, ofreciendo una alternativa eficiente a ChIP-seq con menor entrada de células; se recomienda la validación de las condiciones de etiquetado enzimático y la concentración del anticuerpo para obtener resultados óptimos.

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