Anticuerpo monoclonal de conejo anti-Cullin-4A para WB, IHC-P, ELISA - Q13619

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de Cullin-4A

• CUL4A es la proteína andamio de las ubiquitin ligasas E3 de tipo cullin-RING, que facilita la transferencia de ubiquitina al posicionar el sustrato y la enzima E2 (PubMed:14578910, PubMed:14739464, PubMed:15448697). Referencias relacionadas: PMID:14578910 PMID:14739464 PMID:15448697

• La actividad de la ligasa E3 depende de la nedilación de CUL4A; la CUL4A denedilada se une a TIP120A/CAND1 para inhibir el complejo (PubMed:14578910, PubMed:14739464, PubMed:15448697). Referencias relacionadas: PMID:14578910 PMID:14739464 PMID:15448697

• La especificidad por el sustrato está determinada por los factores asociados a DDB1-CUL4A (DCAF): DCX(DET1-COP1) ubiquitina a JUN (PubMed:14739464); DCX(DDB2) dirige a XPC (PubMed:15811626) y a las histonas H3-H4 para el ensamblaje de nucleosomas (PubMed:16678110, PubMed:17041588, PubMed:24209620). Referencias relacionadas: PMID:14739464 PMID:15811626 PMID:16678110 PMID:17041588 PMID:24209620

• El complejo DCX(DTL) poliubiquitina a CDT1 y a p53/TP53 durante el daño del ADN y la replicación (PubMed:14578910, PubMed:15448697, PubMed:15548678) y media la autoubiquitinación de DTL (PubMed:23478445). Referencias relacionadas: PMID:14578910 PMID:15448697 PMID:15548678 PMID:23478445

• CUL4A, a través de DCX(ERCC8), es esencial en la reparación acoplada a la transcripción (TCR) (PubMed:12732143, PubMed:32355176, PubMed:38316879). Referencias relacionadas: PMID:12732143 PMID:32355176 PMID:38316879

• CUL4A participa en la vía DesCEND al dirigir a las proteínas con degrones C-terminales a través de complejos DCX que contienen TRPC4AP o DCAF12 (PubMed:29779948). Referencias relacionadas: PMID:29779948

• El complejo DCX(AMBRA1) media la transición G1/S al ubiquitinar la ciclina D (PubMed:33854232, PubMed:33854239) y regula los complejos CRL5 al degradar Elongina-C (PubMed:30166453). Referencias relacionadas: PMID:33854232 PMID:33854239 PMID:30166453

• Junto con CUL4B, CUL4A contribuye a la biogénesis de ribosomas (PubMed:26711351). Referencias relacionadas: PMID:26711351

• CUL4A es una fosfoproteína involucrada en las interacciones huésped-virus y es un elemento clave del sistema ubiquitina-proteasoma, que influye en la reparación del ADN, el ciclo celular y los ritmos circadianos.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético que abarca los aminoácidos 660–759; por lo tanto, el anticuerpo probablemente reconoce un epitopo lineal en la región C-terminal de la CUL4A humana. Este diseño suele permitir una detección fiable en condiciones desnaturalizantes de Western blot (WB).
• Para WB, se debe observar una banda esperada de aproximadamente 88 kDa; se recomienda utilizar una escalera de proteínas con marcadores de peso molecular adecuados y optimizar las condiciones de bloqueo y incubación del anticuerpo para el lisado de muestra específico.
• Para IHC-P, los métodos de recuperación de antígeno (por ejemplo, la recuperación de epitopos inducida por calor) pueden ser beneficiosos; valide la especificidad de la tinción en las muestras de tejido humano relevantes utilizando controles adecuados.
• Las aplicaciones de ELISA pueden beneficiarse de la optimización de las concentraciones de antígeno de recubrimiento y los sistemas de detección para garantizar linealidad y sensibilidad; la naturaleza monoclonal de este anticuerpo ayuda a reducir la variabilidad entre lotes.
• Dado que el anticuerpo se produce en conejo, utilice anticuerpos secundarios de IgG anti-conejo para la detección; la reactividad cruzada con otras especies no ha sido validada más allá de la humana, por lo que verifique la reactividad si utiliza muestras no humanas.

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