Anticuerpo monoclonal de conejo anti-DARPP32 para WB, ELISA - Q9UD71

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de DARPP32 (PPP1R1B)

• DARPP32, codificada por el gen PPP1R1B, es una molécula bifuncional de transducción de señales que integra las señales de dopamina y cAMP mediante su regulación de la proteína fosfatasa 1 (PP1) y la proteína quinasa A (PKA).
• Actúa como un potente inhibidor de PP1 cuando es fosforilada en Thr34 por PKA, lo que provoca una alteración de la fosforilación de los sustratos neuronales posteriores y la modulación de la plasticidad sináptica.
• La proteína también es fosforilada en Thr75 por la quinasa 5 dependiente de ciclina (CDK5), lo que la convierte en un inhibidor de PKA y demuestra su función como interruptor molecular en las neuronas estriatales.
• DARPP32 se encuentra predominantemente en el citoplasma y está altamente enriquecida en las neuronas espinosas medianas del estriado, donde media los efectos de la dopamina, el glutamato y otros neurotransmisores.
• El splicing alternativo del transcrito de PPP1R1B produce múltiples isoformas, incluida una forma de longitud completa bien caracterizada y una variante truncada, que pueden presentar propiedades funcionales distintas.
• Las modificaciones postraduccionales, como la acetilación y la fosforilación en múltiples sitios, ajustan con precisión su actividad, estabilidad y distribución subcelular.
• La desregulación de la señalización de DARPP32 se ha asociado con trastornos neurológicos y psiquiátricos, incluidos la enfermedad de Parkinson, la esquizofrenia y la adicción a las drogas.
• El peso molecular teórico de la isoforma canónica es de aproximadamente 23 kDa, lo que concuerda con la banda observada en la transferencia Western.

Guía experimental y consejos técnicos

• Para la transferencia Western, utilice un tampón RIPA recién preparado que contenga inhibidores de fosfatasas y proteasas para preservar el estado de fosforilación de DARPP32.
• Considere utilizar un tampón de carga reductor y calentar las muestras a 70 °C durante 10 minutos para evitar los artefactos de agregación comúnmente observados con DARPP32.
• El inmunógeno corresponde a la región N-terminal (aa1-100); este anticuerpo debería reconocer tanto la proteína de longitud completa como ciertos fragmentos N-terminales.
• Debido a la alta conservación de la secuencia, valide la especificidad del anticuerpo en muestras de knockout o con silenciamiento mediante siRNA, especialmente cuando trabaje con tejidos de ratón o rata.
• Para ELISA, determine la concentración óptima de recubrimiento mediante una titulación en tablero de ajedrez utilizando el péptido inmunizante o la proteína DARPP32 recombinante como estándar.
• Incluya un control positivo conocido (por ejemplo, lisado de tejido estriatal) y un control negativo (por ejemplo, una línea celular no neuronal) en cada experimento.
• Debido a que DARPP32 es una fosfoproteína de baja abundancia en algunas muestras, pueden ser necesarias estrategias de amplificación de señal, como el uso de sustratos ECL de alta sensibilidad, para su detección.

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