Anticuerpo Policlonal Anti-DDOST para WB, IHC-P, ELISA - P39656

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de DDOST

• Identidad de la proteína e isoformas: DDOST codifica la subunidad de 48 kDa de la doliquil-difosfo-oligosacárido--proteína glicosiltransferasa, también designada como OST48, WBP1, AGER1 y CDG1R. El empalme alternativo produce múltiples isoformas.
• Función central de glicosilación: La proteína es una subunidad esencial del complejo oligosacariltransferasa (OST), que cataliza la transferencia en bloque de un glicano de manosa alta preensamblado (Glc3Man9GlcNAc2) desde el doliquil-pirofosfato hasta residuos de asparagina en polipéptidos nacientes dentro del RE (PubMed:31831667).
  Referencias relacionadas:
  PMID:31831667
• Mecanismo cotraduccional: La actividad de la OST está acoplada a la translocación de proteínas a través del translocón Sec61, lo que permite que la N-glicosilación ocurra de manera cotraduccional en el lado luminal de la membrana del RE.
• Ensamblaje del complejo OST: DDOST es necesario para el ensamblaje de los complejos OST que contienen STT3A y STT3B, que median la glicosilación co- y post-traduccional, respectivamente (PubMed:22467853).
  Referencias relacionadas:
  PMID:22467853
• Localización subcelular: La proteína es un componente de membrana integral del retículo endoplasmático con un péptido señal y múltiples dominios transmembrana.
• Relevancia clínica: Las mutaciones en DDOST se asocian con trastornos congénitos de la glicosilación, lo que destaca su importancia en la salud humana y la enfermedad.
• Peso molecular: El polipéptido canónico de DDOST tiene una masa molecular calculada de aproximadamente 50,8 kDa (UniProt), mientras que la proteína madura migra alrededor de 51 kDa en SDS-PAGE.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno (proteína recombinante que cubre los aminoácidos 40–300) corresponde al dominio luminal del DDOST humano, lo que probablemente genera anticuerpos que reconocen epítopos tanto nativos como desnaturalizados. Para WB, son apropiadas las condiciones desnaturalizantes y reductoras.
• Al realizar IHC-P, la recuperación de antígenos con tratamiento térmico o enzimático puede mejorar la detección; se recomienda incluir un tejido de control positivo conocido, como hígado o páncreas.
• Para ELISA, el anticuerpo puede usarse para la detección directa o de captura de DDOST recombinante o endógeno en lisados celulares y tisulares. Se ha informado reactividad cruzada con DDOST de ratón y rata, por lo que se aconsejan experimentos de titulación en cada especie.
• La optimización de la señal puede requerir la determinación empírica de la dilución del anticuerpo. Comience con 1:500–1:2000 para WB y 1:200 para IHC-P y ajústese según sea necesario.
• Dado que DDOST es una proteína residente del RE expresada ubicuamente, puede servir como control de carga o estándar de referencia para estudios de glicosilación.

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