Anticuerpo policlonal de conejo anti-DDX21 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9NR30

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de DDX21

• DDX21, también conocida como ARN helicasa nucleolar 2, Gu-alfa y proteína de caja DEAD 21, es miembro de la familia de ARN helicasas de caja DEAD, con un peso molecular predicho de ~87 kDa (UniProt: Q9NR30).
• En el nucleolo, DDX21 se localiza en los loci de ADN ribosomal y se une directamente a ARNr y ARN nucleolares pequeños (ARNsn), promoviendo la transcripción, el procesamiento y la 2'-O-metilación del ARNr al facilitar el reclutamiento de ARNsn. Referencias relacionadas: PMID:25470060 , PMID:25477391
• En el nucleoplasma, DDX21 se une al ARN 7SK y es reclutada a los promotores de genes transcritos por la ARN polimerasa II, donde facilita la liberación de P-TEFb del complejo inhibidor 7SK snRNP de manera dependiente de la actividad helicasa, mejorando así la transcripción. Referencias relacionadas: PMID:25470060
• DDX21 actúa como un cofactor transcripcional para JUN, siendo necesaria para la fosforilación de JUN en Ser-77. Referencias relacionadas: PMID:11823437 , PMID:25260534
• La proteína exhibe actividad de ARN helicasa dependiente de ATP (desenrollando ARN de doble cadena) y actividad de ARN plegasa (introduciendo estructura secundaria en ARN de cadena simple). Referencias relacionadas: PMID:9461305
• La desacetilación por SIRT7 activa la función helicasa de DDX21, permitiéndole superar el estancamiento de la ARN polimerasa mediado por bucles R y prevenir el daño en el ADN asociado a la transcripción. Referencias relacionadas: PMID:28790157
• DDX21 es un componente de un complejo citoplasmático multi-helicasa–TICAM1 que detecta ARN viral de doble cadena, contribuyendo a la inmunidad innata antiviral.
• Subcelularmente, DDX21 es principalmente nucleolar y nucleoplásmica, pero también puede localizarse en el citoplasma, el citosol y las mitocondrias bajo ciertas condiciones.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca los aminoácidos 1–180 cerca del extremo N-terminal de DDX21. Como un anticuerpo policlonal de conejo generado contra una proteína de fusión recombinante, puede reconocer múltiples epítopos dentro de esta región.
• Para western blot (WB) en condiciones desnaturalizantes, se espera una banda correspondiente a la proteína de longitud completa de aproximadamente 87 kDa. Se deben usar lisados de líneas celulares humanas o de ratón con expresión confirmada de DDX21 como controles positivos.
• La localización predominante nucleolar y nucleoplásmica de DDX21 la hace adecuada para inmunofluorescencia (IF/ICC) e inmunohistoquímica (IHC-P). Puede observarse un enriquecimiento nuclear y una tinción punteada nucleolar; se recomienda incluir marcadores de orgánulos apropiados para su verificación.
• Dada la amplia unión al ARN y la naturaleza multidominio de DDX21, el rendimiento del anticuerpo puede variar con los protocolos de fijación, permeabilización y recuperación de antígeno. Es aconsejable optimizar estos parámetros para el tipo específico de célula o tejido.
• Para aplicaciones de ELISA, el anticuerpo puede usarse como reactivo de captura o detección siguiendo una titulación estándar para determinar las concentraciones de trabajo óptimas.

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