Anticuerpo policlonal anti-DHFR para WB - P00374

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de DHFR

• DHFR cataliza la reducción dependiente de NADPH de 7,8-dihidrofolato a 5,6,7,8-tetrahidrofolato, un paso crítico en el metabolismo de un carbono. Referencias relacionadas: PMID:12096917 PMID:15039552 PMID:17569517
• Esta reacción es esencial para la síntesis de novo de timidilato, glicina y purinas, proporcionando precursores de ADN para los genomas nuclear y mitocondrial. Referencias relacionadas: PMID:21876188 PMID:22235121
• DHFR se localiza en el citoplasma, las mitocondrias y el núcleo, apoyando el metabolismo del folato en múltiples compartimentos celulares.
• La enzima se expresa ampliamente en tejidos fetales y adultos, con niveles más altos en el cerebro adulto y la sangre completa.
• El empalme alternativo produce múltiples isoformas, y las mutaciones en DHFR están asociadas con resistencia al metotrexato y variantes de la enfermedad.
• DHFR se une a su propio ARNm y al de DHFR2, lo que indica un posible papel regulador en la expresión génica postranscripcional.
• La proteína sufre ubiquitinación y ha sido identificada en estudios proteómicos a gran escala.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno cubre la DHFR humana de longitud completa (aa 1-187), lo que sugiere una reactividad potencial con la proteína nativa en especies donde la homología es alta (confirmado para humano y ratón). Valídelo en su sistema de muestra.
• Para Western blotting, espere una banda de ~21 kDa. Optimice las condiciones de bloqueo y detección, e incluya los controles de carga adecuados.
• Para inmunofluorescencia/ICC, considere protocolos de fijación y permeabilización que preserven la localización mitocondrial y nuclear de DHFR.
• Al realizar ELISA, la DHFR expresada de forma recombinante o los lisados celulares pueden servir como antígenos; se recomienda la titulación del anticuerpo.
• La expresión de DHFR varía según el tejido y la etapa del ciclo celular; incluya los controles positivos y negativos relevantes en sus experimentos.
• Como anticuerpo policlonal, evalúe la consistencia entre lotes y considere el uso de un péptido de bloqueo para confirmar la especificidad.

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