Anticuerpo policlonal de conejo Anti-DiMetil-DNMT3A-K44 (O88508) para IF/CCI y ELISA

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la ADN (citosina-5)-metiltransferasa 3A (DNMT3A)

• La DNMT3A es una enzima clave requerida para la metilación de novo del ADN a nivel de todo el genoma, esencial para establecer los patrones de metilación durante el desarrollo. Modifica el ADN de manera no procesiva y puede metilar tanto sitios CpG como no CpG.
• La enzima funciona en coordinación con las modificaciones de histonas, metilando preferentemente el ADN enlazador entre nucleosomas y es inhibida por la histona H1. También participa en la impresión génica paterna y materna, con la metilación de la mayoría de los loci improntados en las células germinales.
• La DNMT3A actúa como correpresor transcripcional, por ejemplo, al interactuar con ZBTB18, y puede reprimir la transcripción mediante el reclutamiento de la actividad HDAC. Se recluta a regiones genómicas marcadas por histona H3 trimetilada en Lys36 (H3K36me3).
• Subcelularmente, la DNMT3A se localiza predominantemente en el núcleo y se asocia a los cromosomas, acumulándose en las repeticiones satelitales mayores de la heterocromatina pericéntrica. También se puede encontrar en el citoplasma.
• Existen dos isoformas: la isoforma 1 se expresa de forma ubicua en niveles bajos, mientras que la expresión de la isoforma 2 está restringida a tejidos que sufren metilación de novo activa, como el bazo, el testículo y el timo.
• La proteína sufre múltiples modificaciones postraduccionales, que incluyen fosforilación (por ejemplo, en Ser102, Ser239, Ser251, Ser386, Ser389, Thr120, Thr257), metilación (por ejemplo, omega-N-metilarginina en Arg167) y autometilación en Cys706.

Referencias relacionadas: PMID:10555141, PMID:11399089, PMID:11919202, PMID:16567415, PMID:17713477, PMID:9662389, PMID:11350943, PMID:18823905, PMID:15215868, PMID:20547484, PMID:21481189, PMID:12138111, PMID:15456878, PMID:21183079, PMID:24129315

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético dimetilado en la Lys44 de la DNMT3A de ratón. Para IF/CCI, tenga en cuenta que esta modificación puede ser específica de contexto; valide en su sistema comparando señales entre el bloqueo con péptido metilado y no metilado o usando controles de knockout/knockdown.
• Las aplicaciones de ELISA pueden beneficiarse del uso del péptido de inmunización como control positivo y un péptido no modificado como control negativo para confirmar la especificidad por la dimetilación.
• Dada la reactividad cruzada con humano y rata, este anticuerpo puede ser adecuado para estudiar sitios de metilación conservados entre especies, pero confirme la reactividad específica por especie en sus ensayos.
• Las diluciones de trabajo óptimas deben determinarse empíricamente; los rangos típicos para IF/CCI y ELISA dependen de la aplicación y deben ser optimizados por el usuario final.

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