Anticuerpo monoclonal de conejo anti-DKK3 para WB/IF/ICC/ELISA - Q9UBP4

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de DKK3

• DKK3 (proteína 3 relacionada con Dickkopf), también conocida como REIC o RIG, es una glucoproteína secretada perteneciente a la familia Dickkopf de antagonistas de Wnt. Contiene un péptido señal, dos dominios ricos en cisteína y regiones de hélice superenrollada.
• DKK3 antagoniza la señalización canónica de Wnt/β-catenina al unirse a los correceptores LRP5/6 y promover su internalización mediante las proteínas transmembrana KREMEN, inhibiendo así la interacción entre el ligando y el receptor Wnt.
• Esta proteína desempeña funciones fundamentales en el desarrollo embrionario, incluida la organización del eje anteroposterior, la morfogénesis de las extremidades, la somitogénesis y la formación de los ojos, mediante la modulación local de la actividad de Wnt.
• En los tejidos adultos, DKK3 está implicada en la homeostasis ósea, la supresión tumoral (con frecuencia se encuentra regulada a la baja en cánceres) y procesos neurodegenerativos como la enfermedad de Alzheimer, aunque estas últimas funciones se infieren a partir de la similitud.
• La localización subcelular es exclusivamente extracelular: DKK3 se secreta al espacio extracelular y no parece estar unida a la membrana ni localizada en el interior celular.
• La expresión es máxima en el corazón, el cerebro y la médula espinal, con niveles inferiores en otros tejidos, lo que sugiere funciones reguladoras específicas de cada tejido.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen la N-glucosilación y la formación de enlaces disulfuro, características típicas de las proteínas secretadas con nudos de cisteína, y pueden afectar a su estabilidad y actividad.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 200–350 de DKK3 humano y abarca la región C-terminal rica en motivos de hélice superenrollada. Esta región puede detectar DKK3 de longitud completa y, potencialmente, algunos productos de escisión; verifique el peso molecular en su sistema.
• Para Western blot (WB), el peso molecular previsto es de aproximadamente 38 kDa (calculado a partir de la secuencia de aminoácidos). La glucosilación puede hacer que la banda observada migre ligeramente más arriba. Utilice controles adecuados.
• Para inmunofluorescencia/inmunocitoquímica (IF/ICC), dado que DKK3 es una proteína secretada, la inclusión de un agente bloqueador del aparato de Golgi (por ejemplo, BFA) puede mejorar la tinción intracelular si se desea su retención; de lo contrario, considere analizar la DKK3 secretada en los sobrenadantes celulares mediante ELISA.
• El anticuerpo ha sido probado para aplicaciones de ELISA; puede utilizarse para la captura o detección del antígeno, según el formato del ensayo. Realice pruebas de reactividad cruzada con su matriz específica.
• A pesar de la reactividad cruzada comunicada con ratón y rata, la homología de secuencia en la región del inmunógeno es elevada; aun así, valide la reactividad en tejidos específicos de cada especie.
• Siempre titule el anticuerpo en las condiciones de su ensayo para obtener una relación señal/ruido óptima.

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