Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-ADN-PKcs para WB, IP, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P78527

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de ADN-PKcs

• ADN-PKcs (subunidad catalítica de la proteína quinasa dependiente de ADN), también denominado DNPK1, p460, HYRC o XRCC7, está codificado por el gen PRKDC (ID de gen: 5591) y actúa como subunidad catalítica del complejo ADN-PK.
• Como serina/treonina proteína quinasa, actúa como sensor molecular para el daño del ADN y es esencial para la unión de extremos no homólogos (NHEJ), la vía principal para reparar roturas de doble hebra (DSB) y la recombinación V(D)J. La unión al ADN es necesaria para su actividad catalítica, y es reclutado por XRCC5/Ku80 y XRCC6/Ku70 a los extremos del ADN, donde protege, alinea y secuestra los extremos rotos para evitar su degradación (PubMed:11955432, PubMed:12649176, PubMed:14734805). Referencias relacionadas: PMID:11955432 PMID:12649176 PMID:14734805
• ADN-PKcs fosforila numerosos sustratos en el motivo consenso [ST]-Q, incluyendo la histona H2AX en el 'Ser-139' para regular la respuesta al daño del ADN (PubMed:14627815, PubMed:16046194), p53/TP53, XRCC4, XRCC5, XRCC6 y AKT1 en el 'Ser-473' para promover la señalización de supervivencia celular (PubMed:10026262, PubMed:10467406, PubMed:11889123, PubMed:15262962). Referencias relacionadas: PMID:14627815 PMID:16046194 PMID:10026262 PMID:10467406 PMID:11889123 PMID:15262962
• Más allá de la reparación de DSB, ADN-PKcs contribuye al mantenimiento de los telómeros y previene la fusión de extremos cromosómicos (Por similitud).
• También modula la transcripción (PubMed:11955432, PubMed:12649176, PubMed:14734805) y promueve el ensamblaje temprano de ribosomas al procesar el ARNr precursor en ARNr 18S maduro en el processoma de subunidad pequeña, interactuando con el ARN sno U3 (PubMed:32103174). Referencias relacionadas: PMID:11955432 PMID:12649176 PMID:14734805 PMID:32103174
• En inmunidad innata, ADN-PKcs regula la vía cGAS-STING al fosforilar CGAS y PARP1, y forma parte del complejo HDP-RNP que activa IRF3 (PubMed:28712728, PubMed:33273464, PubMed:35460603). Referencias relacionadas: PMID:28712728 PMID:33273464 PMID:35460603
• La proteína se localiza predominantemente en el núcleo y el nucleolo, con cierta presencia en el citosol, y está sujeta a múltiples modificaciones postraduccionales que incluyen fosforilación, acetilación y ubiquitinación.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca los aminoácidos 3993–4128 de ADN-PKcs humano, una región C-terminal; tenga en cuenta esta ubicación del epitopo al combinar con otros anticuerpos o diseñar estrategias de detección.
• Para Western blot, el objetivo tiene un peso molecular predicho de 469 kDa; asegure un porcentaje de gel adecuado (por ejemplo, 6% de poliacrilamida) y tiempos de transferencia prolongados para facilitar una transferencia eficiente.
• Aunque está validado para múltiples aplicaciones, las diluciones óptimas deben determinarse empíricamente en el sistema experimental del usuario final, partiendo de los rangos de concentración recomendados en los protocolos estándar.
• La reactividad cruzada está reportada para muestras humanas; para tejidos o líneas celulares no humanos, realice una alineación de secuencia entre especies antes de usar y valide con controles adecuados.
• Dado que ADN-PKcs es una proteína nuclear, ajuste los pasos de fijación y permeabilización para inmunofluorescencia o inmunohistoquímica para garantizar una accesibilidad adecuada al antígeno.

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