Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-DNMT3B para WB, ChIP, ELISA - Q9UBC3

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de DNMT3B

• DNMT3B es una ADN (citosina-5)-metiltransferasa que cataliza la metilación de ADN de novo, estableciendo patrones de metilación críticos para el desarrollo embrionario y la diferenciación celular.
• Metila preferentemente el ADN nucleosomal dentro de la región central y puede coordinar la metilación del ADN con modificaciones de histonas para regular la estructura de la cromatina y la expresión génica.
• Existen múltiples isoformas generadas por splicing alternativo; las isoformas 1, 3 y posiblemente la 2 son funcionales, mientras que las isoformas 4 y 5 carecen de motivos de metiltransferasa conservados y es probable que sean catalíticamente inactivas.
• Más allá de su papel catalítico, DNMT3B funciona como correpresor transcripcional al interactuar con CBX4 y ZHX1, mediando el silenciamiento génico independientemente de la actividad de metilación.
• En asociación con DNMT1 y el factor CTCFL/BORIS, DNMT3B modula la dimetilación de H3K4 y H3K9 de histonas en el promotor de BAG1, contribuyendo a la activación transcripcional.
• DNMT3B es necesario para el silenciamiento del gen DUX4 en células somáticas; su desregulación está relacionada con la distrofia muscular facioescapulohumeral tipo 4 (FSHD4). Referencias relacionadas: PMID:27153398
• Localizado en el núcleo, DNMT3B se expresa ampliamente, con niveles altos en hígado fetal, corazón, riñón y placenta, y niveles más bajos en tejidos adultos como el cerebro y el músculo esquelético. La isoforma 1 está ausente en cerebro, músculo esquelético y PBMC.
• Las modificaciones postraduccionales, incluyendo la fosforilación y la citrulinación, pueden influir en la estabilidad y actividad de DNMT3B; también es objetivo de la conjugación tipo ubiquitina.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 206–360 del DNMT3B humano, una región que contiene parte del dominio PWWP; verifique la expresión de isoformas funcionales en su sistema de muestra para garantizar la detección.
• Para Western blot (WB), espere una banda cercana a 96 kDa; valide la especificidad con controles de knockout o knockdown de DNMT3B, ya que algunas isoformas pueden migrar con tamaños diferentes.
• Para ChIP, optimice cuidadosamente el entrecruzamiento, la fragmentación y la concentración de anticuerpo, ya que DNMT3B es una proteína asociada a la cromatina nuclear; incluya regiones negativas apropiadas.
• En ELISA, genere una curva estándar con el inmunógeno recombinante para evaluar la linealidad; el anticuerpo también puede usarse para captura o detección en ELISA sándwich con pares emparejados.
• Debido a que DNMT3B se expresa a niveles bajos en muchos tejidos, considere el enriquecimiento nuclear o la carga de alta cantidad de proteína para una detección sensible.
• No se ha reportado reactividad cruzada con especies no humanas; valide en el sistema relevante si se usa más allá de muestras humanas.

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