Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-EGFR (Fosfo Y1068) para WB y ELISA - P00533

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de EGFR

• EGFR es una receptor tirosina quinasa que se une a ligandos de la familia EGF, desencadenando la dimerización del receptor y la autofosforilación en residuos citoplasmáticos clave, incluido Y1068, para activar la señalización aguas abajo (PubMed:10805725, PubMed:27153536, PubMed:2790960). Referencias relacionadas: PMID:10805725, PMID:27153536, PMID:2790960
• El receptor fosforilado recluta proteínas adaptadoras como GRB2, lo que conduce a la activación de al menos cuatro cascadas de señalización principales: RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCγ-PKC y módulos STAT (PubMed:27153536). Referencias relacionadas: PMID:27153536
• EGFR fosforila directamente otras proteínas, incluidas RGS16 y MUC1, vinculando la señalización de EGF con la señalización de GPCR y las vías de adhesión celular (PubMed:11602604, PubMed:11483589). Además, puede activar la cascada de señalización NF-kappa-B (PubMed:11116146). Referencias relacionadas: PMID:11602604, PMID:11483589, PMID:11116146
• La interacción con CCDC88A/GIV retiene a EGFR en la membrana celular, promoviendo la migración celular (PubMed:20462955). Referencias relacionadas: PMID:20462955
• Subcelularmente, EGFR se localiza en la membrana celular, retículo endoplásmico, aparato de Golgi, núcleo y endosomas, y puede ser secretado. Esta distribución dinámica sustenta sus múltiples funciones de señalización.
• Se expresa de forma ubicua; la isoforma 2 también se detecta en cánceres de ovario. EGFR también funciona como receptor huésped para la entrada del virus de la hepatitis C (VHC) en los hepatocitos.
• Las modificaciones postraduccionales clave incluyen la fosforilación (especialmente en Y1068 después de la unión al ligando), glicosilación, ubiquitinación y palmitoilación, esenciales para su actividad quinasa y la duración de la señalización.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido fosforilado sintético correspondiente a la región Y1068; para WB, asegúrese de incluir inhibidores de fosfatasa en los tampones de lisis para preservar la fosforilación.
• Para ELISA, el recubrimiento con el péptido fosforilado antígeno puede ayudar a evaluar la especificidad del anticuerpo; un péptido no fosforilado puede servir como control negativo.
• Este anticuerpo ha demostrado reactividad cruzada con EGFR humano y de ratón, por lo que se puede aplicar a estudios en ambas especies; sin embargo, se recomienda la validación en el sistema de muestra objetivo.
• Considere usar un control de carga que no se vea afectado por el estado de fosforilación para normalizar las señales de WB.
• Dado el peso molecular de 134 kDa, ajuste el porcentaje del gel y las condiciones de transferencia de forma adecuada.

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