Anticuerpo policlonal anti-EP300 para IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q09472

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de EP300

• EP300 codifica la histona acetiltransferasa p300, un coactivador transcripcional multidominio perteneciente a la familia p300/CBP. La proteína contiene un bromodominio central y un dominio de histona acetiltransferasa (HAT).
• p300 funciona como una histona acetiltransferasa capaz de acetilar las cuatro histonas centrales de los nucleosomas, etiquetando así epigenéticamente la cromatina para activar la transcripción (PubMed:23415232, PubMed:23934153, PubMed:8945521). Referencias relacionadas: PMID:23415232 PMID:23934153 PMID:8945521
• Acetila específicamente la histona H3 en Lys-18, Lys-27 y Lys-122, y la histona H4 en Lys-5 y Lys-12. Estas modificaciones promueven la inestabilidad de los nucleosomas y potencian el inicio de la transcripción (PubMed:21131905, PubMed:23911289, PubMed:23415232, PubMed:37731000). Referencias relacionadas: PMID:21131905 PMID:23911289 PMID:23415232 PMID:37731000
• Además de las histonas, p300 acetila numerosos sustratos no histónicos, incluidos factores de transcripción (por ejemplo, STAT3 y FOXO1), enzimas metabólicas (PKM2 y PCK1) y proteínas de reparación del ADN, modulando su actividad, estabilidad y localización (PubMed:15653507, PubMed:15890677, PubMed:24120661, PubMed:24939902). Referencias relacionadas: PMID:15653507 PMID:15890677 PMID:24120661 PMID:24939902
• La proteína se localiza en el núcleo, el citoplasma y los cromosomas, lo que refleja sus diversas funciones en la transcripción, la señalización y el mantenimiento de la estructura de la cromatina.
• p300 participa en la regulación del ritmo circadiano al asociarse con CLOCK o NPAS2, lo que conduce a una acetilación rítmica de las histonas en los promotores de los genes controlados por el reloj circadiano (PubMed:14645221). Referencias relacionadas: PMID:14645221
• EP300 está asociado con múltiples enfermedades: los reordenamientos cromosómicos y las mutaciones están relacionados con la discapacidad intelectual (síndrome de Rubinstein-Taybi tipo 2) y diversos tipos de cáncer. La proteína también interactúa con proteínas virales, como E1A del adenovirus y Tat del VIH-1.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno comprende los 270 aminoácidos N-terminales de EP300 humano, incluido el dominio TAZ1 implicado en las interacciones proteína-proteína. Esta región es exclusiva de EP300 y puede reducir la reactividad cruzada con la proteína estrechamente relacionada CREBBP.
• Para la inmunohistoquímica (IHC-P) y la inmunofluorescencia (IF/ICC), considere optimizar la recuperación antigénica y la concentración del anticuerpo, dada la localización nuclear/citoplasmática de EP300 y su elevado peso molecular (~264 kDa).
• ELISA puede utilizarse como plataforma de detección cuantitativa; valide el ensayo con proteína EP300 recombinante o lisados celulares que expresen EP300 para garantizar la especificidad.
• Debido a que EP300 es una proteína grande con múltiples dominios, las condiciones desnaturalizantes de Western blot (WB) pueden requerir tiempos de transferencia prolongados y un bloqueo cuidadoso para detectar la banda de longitud completa.

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