Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-Epac1/RAPGEF3 para WB, IHC-P, ELISA - O95398

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de Epac1/RAPGEF3

• Codificado por el gen RAPGEF3, Epac1 (Proteína de intercambio activada directamente por cAMP 1) es un factor de intercambio de nucleótidos guanina (GEF) regulado por cAMP que activa específicamente las GTPasas pequeñas RAP1A y RAP2A.
• Como mediador clave de la señalización por cAMP, Epac1 modula procesos fisiológicos que incluyen la angiogénesis y el control dinámico de la función de barrera endotelial a través de una vía independiente de Rho.
• Epac1 facilita el ensamblaje de un complejo de señalización que involucra a PDE3B y PIK3R6, lo que conduce a la activación del complejo PI3K gamma, resaltando aún más su papel en la señalización compartimentada por cAMP.
• La proteína es esencial para la remodelación del citoesqueleto de actina en las uniones intercelulares, incluida la formación de fibras de estrés y actina de unión, manteniendo así la integridad endotelial.
• Epac1 se localiza en el sistema de endomembranas y se expresa ampliamente en todos los tejidos, con los niveles más altos observados en riñón adulto, corazón, tiroides, cerebro y riñón fetal.
• Su actividad está estrictamente regulada por la unión directa de cAMP a su dominio de unión a nucleótidos cíclicos, lo que lo clasifica como un factor de intercambio de nucleótidos que se une a cAMP.
• Se ha descrito la fosforilación postraduccional y el empalme alternativo genera múltiples isoformas, lo que amplía su diversidad funcional.
• Palabras clave de UniProt incluyen: Estructura 3D, Angiogénesis, cAMP, Unión a cAMP, Factor liberador de guanina nucleótidos, Membrana, Unión a nucleótidos, Fosfoproteína, Identificación proteómica, Proteoma de referencia.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a un péptido C-terminal (aa 824-923) de Epac1 humano; confirma que esta región está presente en la isoforma diana si se considera el empalme alternativo.
• Dada la fuerte expresión específica de tejido, considera usar lisados de riñón humano, corazón o cerebro como controles positivos para transferencia Western.
• Para inmunohistoquímica, valida el anticuerpo en secciones embebidas en parafina fijadas con formalina (FFPE), empleando recuperación de antígeno si es necesario; incluye tejidos de ratón y rata como controles de reactividad cruzada.
• Realiza diluciones en serie para determinar las concentraciones óptimas para cada aplicación; los rangos de partida típicos para anticuerpos monoclonales de conejo son 1:500–1:2000 para WB y 1:100–1:500 para IHC.
• Al realizar transferencias Western, el peso molecular predicho es ~104 kDa; usa porcentajes de gel adecuados (por ejemplo, SDS-PAGE al 8%) y tiempos de transferencia prolongados para proteínas de alto peso molecular.

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