Anticuerpo policlonal de conejo anti-ERK2 para WB, IHC-P, IF/ICC y ELISA - P28482

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de ERK2

• ERK2 (MAPK1) es una serina/treonina cinasa y un componente esencial de la cascada de señalización MAPK/ERK. Actúa junto con ERK1 (MAPK3) para regular diversos procesos celulares, incluidos el crecimiento, la adhesión, la supervivencia y la diferenciación, mediante la fosforilación de más de 160 sustratos. Referencias relacionadas: PMID:35831023
• La cinasa fosforila una amplia variedad de dianas citoplasmáticas, nucleares y organelares, como factores de transcripción (ATF2, ELK1, FOS), proteínas del citoesqueleto (MAP2, CTTN), reguladores de la apoptosis (BAD, MCL1) y controladores de la traducción (EIF4EBP1), coordinando así la expresión génica, la dinámica del citoesqueleto y la apoptosis.
• En condiciones hipóxicas, ERK2 fosforila PGK1 en las mitocondrias para suprimir la formación de acetil-coenzima A a partir de piruvato (PubMed:26942675). Referencias relacionadas: PMID:26942675
• ERK2 también funciona como represor transcripcional, uniéndose a secuencias consenso [GC]AAA[GC] para reducir la expresión de genes inducidos por interferón gamma, como CCL5, IRF7 y OAS1, independientemente de su actividad cinasa.
• La localización subcelular depende del contexto: ERK2 se encuentra en el citoplasma, asociada con el citoesqueleto y el huso mitótico, en el núcleo, en los centrosomas, en las caveolas de la membrana y en las adhesiones focales, lo que refleja sus diversas funciones de señalización.
• Entre las principales modificaciones postraduccionales se incluyen la fosforilación (motivo TEY del bucle de activación), la acetilación y la ubiquitinación, con implicaciones para la duración de la señal y la localización celular. Se clasifica bajo los términos clave: cinasa, serina/treonina-proteína cinasa, fosfoproteína, acetilación, conjugación de ubiquitina, entre otros.

Orientación experimental y consejos técnicos

• Para Western blot, el peso molecular previsto es de 41 kDa; considere utilizar lisados de células completas de HeLa, HEK293 o Jurkat como controles positivos, ya que ERK2 se expresa de forma ubicua.
• En inmunohistoquímica (IHC-P), pruebe distintos métodos de recuperación antigénica y diluciones del anticuerpo, ya que la localización de ERK2 es tanto nuclear como citoplasmática; deben validarse secciones de tejidos normales y tumorales adecuados.
• Para inmunofluorescencia (IF/ICC), unas condiciones óptimas de fijación y permeabilización conservarán las señales de ERK2 tanto nucleares como citoesqueléticas; considere realizar una tinción conjunta con marcadores específicos de compartimento.
• La aplicación ELISA puede adaptarse para la detección cuantitativa; combínela con un anticuerpo de captura de ERK2 y valide el ensayo en matrices de proteína recombinante y de muestras nativas.
• El inmunógeno se encuentra dentro de los residuos 200–300, una región distinta del motivo regulador TEY; este anticuerpo puede reconocer tanto ERK2 fosforilada como no fosforilada. Si es necesario, valide el comportamiento dependiente de la fosforilación.
• Dado que se trata de un anticuerpo policlonal, debe verificarse la consistencia entre lotes en cada aplicación; la validación por KO, cuando está disponible, respalda la especificidad de la diana.

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