Anticuerpo policlonal Anti-FBXL5 para WB, ELISA - Q9UKA1

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de FBXL5

• FBXL5 (proteína 5 de repeticiones F-box/LRR) es un componente del complejo E3 ubiquitina-proteína ligasa SCF (SKP1-culina-F-box). Regula la homeostasis del hierro al direccionar a IREB2/IRP2 para su ubiquitinación y degradación. Referencias relacionadas: PMID:19762596, PMID:19762597
• El dominio N-terminal similar a hemirritrina (Hr) contiene un centro metálico de dihierro que actúa como sensor de hierro. En condiciones de bajo contenido de hierro, FBXL5 es inestable; la unión del hierro estabiliza la proteína. Referencias relacionadas: PMID:19762596, PMID:19762597
• El dominio C-terminal contiene un grupo [2Fe-2S] sensible al redox que, tras la oxidación, permite que FBXL5 reclute a IRP2 para su degradación de manera dependiente del oxígeno. Referencias relacionadas: PMID:32126207
• FBXL5 también ubiquitina a DCTN1, componente del complejo de dinactina, promoviendo su degradación. Referencias relacionadas: PMID:17532294
• En el núcleo, FBXL5 ubiquitina al factor de transcripción SNAI1, impidiendo su unión al ADN y promoviendo su degradación. Referencias relacionadas: PMID:24157836
• FBXL5 regula negativamente la respuesta al daño del ADN al mediar la degradación de la proteína de reparación del ADN NABP2. Referencias relacionadas: PMID:25249620
• Se localiza principalmente en el citoplasma y la región perinuclear, pero también se transloca al núcleo. Sus dominios incluyen repeticiones ricas en leucina y grupos de hierro-azufre.
• El empalme alternativo genera múltiples isoformas, como se indica en la identificación por proteómica y los datos del proteoma de referencia.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno cubre los aminoácidos 1–310, correspondientes a los dominios N-terminales similar a hemirritrina y F-box, que están evolutivamente conservados en humano, ratón y rata. Esta región probablemente explica la reactividad cruzada observada.
• Para transferencia Western (WB), tener en cuenta el peso molecular teórico de aproximadamente 79 kDa (UniProt) o los 79 kDa informados por el proveedor. Confirmar el tamaño de la banda en su matriz de muestra específica y validar la especificidad de la señal usando controles adecuados (por ejemplo, lisados de silenciamiento o knockout).
• En aplicaciones de ELISA, la naturaleza policlonal puede permitir la detección de la proteína diana tanto nativa como desnaturalizada. Optimizar las condiciones de recubrimiento y detección de forma empírica.
• Tener en cuenta que FBXL5 sufre empalme alternativo; por lo tanto, se pueden detectar múltiples bandas en WB. Validar el perfil de reactividad del anticuerpo en el tejido o línea celular correspondiente.
• Al igual que con cualquier anticuerpo policlonal, se debe verificar la consistencia entre lotes, y recomendamos realizar una prueba de preadsorción si se requiere una alta especificidad para su ensayo.

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