Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-GSDMD (Longitud completa + extremo C) para WB, ELISA - P57764

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de GSDMD

• Gasdermina-D (GSDMD) es un miembro de la familia de las gasderminas y actúa como precursor de una proteína formadora de poros fundamental para la piroptosis y la defensa del huésped. Referencias relacionadas: PMID:26375003, PMID:26375259, PMID:27281216
• Tras ser escindido por caspasas inflamatorias (CASP1/4/5), el fragmento N-terminal se transloca a la membrana plasmática, se une a lípidos de la hoja interna como los fosfatos de fosfatidilinositol y se oligomeriza para formar poros de 10 a 15 nm, liberando IL-1β e IL-18 y desencadenando la piroptosis. Referencias relacionadas: PMID:27281216, PMID:27418190, PMID:29898893
• Los poros de GSDMD también median la permeabilización de la membrana mitocondrial, lo que conduce a la liberación de ADNmt, y el fragmento N-terminal presenta actividad bactericida directa contra bacterias Gram-negativas y Gram-positivas. Referencias relacionadas: PMID:27281216
• En el intestino delgado, un fragmento escindido por CASP3/7 actúa como coactivador transcripcional de STAT1, promoviendo la expresión de CIITA y MHC de clase II para mantener la tolerancia alimentaria.
• GSDMD se expresa en células en diferenciación del esófago y el estómago, y su activación en células endoteliales cerebrales puede causar la ruptura de la barrera hematoencefálica durante una piroptosis excesiva.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen palmitoilación, fosforilación y ubiquitinación, y pertenece a la familia de las gasderminas caracterizada por un dominio N-terminal conservado formador de poros.
• La escisión por el alérgeno de papaína genera un fragmento formador de poros que libera específicamente IL-33, impulsando la inflamación de tipo 2. Referencias relacionadas: PMID:35794369

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno (aa 346-484) corresponde a la porción del extremo C; por lo tanto, este anticuerpo puede reconocer tanto a GSDMD de longitud completa como al fragmento del extremo C escindido. Para Western blot, considere validar la detección de la proteína endógena en condiciones de activación del inflamasoma para distinguir las especies escindidas.
• Una banda de aproximadamente 53 kDa representa a GSDMD de longitud completa; la escisión libera el dominio formador de poros N-terminal (~31 kDa) y el fragmento del extremo C (~22 kDa). Utilice controles adecuados (por ejemplo, macrófagos tratados con LPS+ATP) para confirmar la especificidad.
• Para ELISA, el anticuerpo puede ser apto como reactivo de captura o detección. Considere combinarlo con un anticuerpo específico para el extremo N para cuantificar diferencialmente GSDMD de longitud completa frente al escindido. Optimice las condiciones de recubrimiento y bloqueo de forma empírica.
• Dado que GSDMD forma poros oligoméricos, la solubilidad y conformación pueden variar entre tipos de muestra; incluya detergentes suaves y sonicación en los tampones de lisis para una extracción eficiente.

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