Anticuerpo policlonal de conejo anti-HCRT para WB, ELISA - O43612

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de HCRT

• HCRT codifica el precursor de los neuropéptidos orexina, también conocidos como hipocretina, implicados en la regulación de la conducta alimentaria y los ciclos de sueño-vigilia.
• El precursor prepro-orexina se procesa proteolíticamente para producir dos neuropéptidos activos: orexina-A y orexina-B, que se unen con alta afinidad a sus respectivos receptores HCRTR1 y HCRTR2.
• La señalización de la orexina está implicada en funciones homeostáticas más amplias, incluyendo el metabolismo energético, la regulación autonómica, el equilibrio hormonal y la homeostasis de fluidos.
• HCRT se expresa predominantemente en el núcleo subtalámico, con niveles indetectables en otras regiones cerebrales y tejidos periféricos probados (corazón, placenta, pulmón, hígado, músculo esquelético, riñón, páncreas).
• Subcelularmente, el precursor se localiza en el retículo endoplásmico rugoso y se secreta a través de vesículas citoplasmáticas en los terminales sinápticos.
• Las modificaciones postraduccionales clave incluyen la amidación, la formación de puentes disulfuro y la formación de ácido piroglutámico N-terminal, que son críticas para la actividad del neuropéptido.
• Clínicamente, la disfunción de HCRT se asocia con variantes de enfermedades vinculadas a la narcolepsia y otros trastornos del sueño (palabra clave de UniProt: variante de enfermedad).

Guía experimental y consejos técnicos

• Para la detección por Western blot, considere el peso molecular predicho de 13 kDa; valide el anticuerpo en su sistema de muestras utilizando controles positivos apropiados de tejido cerebral (núcleo subtalámico) o proteína recombinante.
• Debido a la expresión restringida de HCRT, asegúrese de realizar un enriquecimiento de la muestra del sistema nervioso central; el tejido de corazón, placenta, hígado o riñón puede servir como control negativo basado en los niveles indetectables reportados.
• En aplicaciones de ELISA, el anticuerpo puede explorarse como reactivo de captura o detección; optimice la concentración de recubrimiento y las condiciones de bloqueo de forma empírica.
• Se ha reportado reactividad cruzada con ortólogos de ratón y rata; sin embargo, se recomienda el alineamiento de secuencias de la región del inmunógeno entre especies para confirmar la especificidad.
• Considere ensayos de preabsorción o competencia de péptidos para confirmar la especificidad si aparecen bandas inespecíficas en el Western blot.

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