Anticuerpo monoclonal Anti-HIBADH para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P31937

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de HIBADH

• HIBADH (3-hidroxisobutirato deshidrogenasa) es una enzima mitocondrial perteneciente a la familia de las oxidorreductasas, que utiliza NAD como cofactor.
• Desempeña un papel clave en el catabolismo de los aminoácidos de cadena ramificada (valina, leucina, isoleucina), específicamente en la conversión de 3-hidroxisobutirato a semialdehído de metilmalonato.
• La proteína se localiza en la mitocondria, como lo indica su péptido de tránsito mitocondrial, que se escinde para producir la enzima madura.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen la acetilación, que puede regular su actividad enzimática o estabilidad.
• Se ha detectado expresión de HIBADH en fibroblastos de piel; su expresión en otros tejidos puede inferirse a partir de su función metabólica.
• Estudios estructurales han proporcionado la estructura 3D de HIBADH, lo que ayuda a comprender su mecanismo catalítico y reconocimiento de sustratos.
• La proteína ha sido identificada mediante secuenciación directa de proteínas y abordajes de proteómica, lo que confirma su presencia en las mitocondrias humanas.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 37-336 de la HIBADH humana (NP_689953.1), que excluye el péptido de tránsito mitocondrial predicho (aproximadamente los primeros 36 aminoácidos); por lo tanto, es probable que el anticuerpo reconozca la forma mitocondrial madura.
• Para Western blot (WB), se espera una banda de aproximadamente 35 kDa (coherente con el peso molecular de UniProt de 35,3 kDa). Confirme la especificidad utilizando controles positivos y negativos adecuados (por ejemplo, células que sobreexpresan HIBADH o tejidos con expresión conocida).
• En inmunohistoquímica (IHC-P) e inmunofluorescencia (IF/ICC), se deben observar patrones de tinción mitocondrial. La colocalización con marcadores mitocondriales puede ayudar a validar la especificidad.
• El anticuerpo presenta reactividad cruzada con HIBADH de humano, ratón y rata; al utilizar muestras de roedores, verifique la homología de secuencia en la región del inmunógeno para asegurar una reactividad comparable.
• Para aplicaciones de ELISA, considere utilizar el inmunógeno recombinante como control positivo y titule la concentración del anticuerpo para obtener una relación señal-ruido óptima.
• Para minimizar la unión no específica, se recomiendan tampones de bloqueo adecuados (por ejemplo, 5% de leche descremada o BSA) y la optimización de la dilución adecuada.

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