Anticuerpo monoclonal de conejo anti-HLA-DPB1 para WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P04440

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de HLA-DPB1

• HLA-DPB1 es la cadena beta del antígeno de histocompatibilidad HLA de clase II, una glucoproteína transmembrana heterodimérica que desempeña un papel central en la respuesta inmunitaria adaptativa al presentar antígenos peptídicos exógenos a las células T CD4+. Los péptidos procesados, generalmente de 10–30 residuos de longitud, se cargan en moléculas del MHC de clase II dentro del sistema endosómico/lisosómico.
• La molécula funcional del MHC de clase II se ensambla como un heterononámero formado por tres heterodímeros alfa-beta asociados a un trímero de cadena invariante (CD74). Tras entrar en la vía endosómica, CD74 es escindida progresivamente por proteasas como la catepsina S (CTSS) y la catepsina L (CTSL), dejando un péptido CLIP residual en el surco de unión, que posteriormente se intercambia por péptidos antigénicos de alta afinidad con la ayuda del editor peptídico HLA-DM.
• El proceso de carga antigénica tiene lugar en un compartimento endosómico/lisosómico tardío especializado, donde el microambiente ácido facilita tanto la proteólisis de los antígenos internalizados como la reacción de intercambio peptídico. En las células B, este proceso está modulado adicionalmente por HLA-DO, que regula la actividad de HLA-DM.
• HLA-DPB1 es miembro de la familia de genes de la cadena beta del MHC de clase II y se localiza en el locus HLA-DP del cromosoma 6. Entre sus nombres alternativos se incluyen DPB1, HLA-DP, HLA-DPB y HLA-DP1B.
• A nivel subcelular, HLA-DPB1 transita por el retículo endoplásmico y el aparato de Golgi antes de llegar a la superficie celular. También se detecta en endosomas, lisosomas y la red trans-Golgi, lo que refleja su dinámica ruta intracelular durante la carga peptídica y la expresión en la superficie.
• La proteína se clasifica como una glucoproteína transmembrana con un péptido señal, una única hélice transmembrana y enlaces disulfuro. Experimenta glucosilación ligada a N y es miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas.
• Las moléculas del MHC de clase II, incluido HLA-DPB1, se expresan constitutivamente en células profesionales presentadoras de antígenos, como células dendríticas, células B y macrófagos, pero también pueden inducirse en otros tipos celulares, incluidas las células epiteliales intestinales, donde participan en la inmunidad de las mucosas.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno utilizado para generar este anticuerpo es un péptido sintético que abarca los residuos 1–100 de HLA-DPB1 humano, correspondiente a la región extracelular N-terminal. Esta región incluye el péptido señal y parte del dominio β1, que participa en la unión peptídica y la formación del heterodímero del MHC II. Considere validar la accesibilidad del epítopo en condiciones nativas frente a desnaturalizantes para su aplicación específica.
• Para la transferencia Western, se espera una banda que migre aproximadamente a 29 kDa en condiciones reductoras. Debido a la glucosilación y a la formación de complejos proteicos, también pueden observarse especies de mayor peso molecular. Optimice las condiciones de bloqueo y lavado para minimizar la unión inespecífica en lisados complejos.
• En inmunofluorescencia (IF-P) e inmunohistoquímica (IHC-P), el anticuerpo se dirige a un antígeno asociado a la membrana. La recuperación antigénica mediante calor utilizando un tampón de citrato (pH 6,0) suele ser beneficiosa para secciones fijadas con formalina e incluidas en parafina. Incluya controles de isotipo adecuados y controles positivos específicos del tejido, como amígdala o ganglio linfático, donde HLA-DPB1 se expresa en niveles elevados.
• Este anticuerpo muestra reactividad cruzada con ratón y rata, lo que indica el reconocimiento de un epítopo conservado. Al utilizar muestras de roedores, tenga en cuenta las posibles diferencias en la distribución de los tipos celulares y los niveles de expresión del MHC de clase II. Se recomiendan experimentos piloto para confirmar la idoneidad en su sistema modelo.
• Para aplicaciones de ELISA, el anticuerpo puede utilizarse como reactivo de captura o de detección frente a HLA-DPB1 recombinante o nativo. La combinación con un anticuerpo anti-cadena alfa de HLA-DP puede ayudar a garantizar la detección del heterodímero intacto. Valide el ensayo en la matriz de muestra pertinente para descartar interferencias de HLA soluble o de moléculas del MHC de clase I con reactividad cruzada.

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