Anticuerpo monoclonal de conejo anti-HLA-DR para WB, IF/ICC, ELISA - P01903

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de HLA-DR

• El gen HLA-DRA codifica la cadena alfa del antígeno de histocompatibilidad HLA de clase II DR, que se combina con la cadena beta (HLA-DRB) para formar la molécula funcional del MHC de clase II en las células presentadoras de antígenos.
• El complejo MHCII presenta péptidos antigénicos extracelulares (normalmente de 10-30 aminoácidos) a las células T CD4 positivas, guiando las funciones efectoras de los linfocitos T colaboradores que impulsan la inmunidad mediada por anticuerpos y la activación de los macrófagos.
  Referencias relacionadas:
  PMID:15265931, PMID:15322540, PMID:17334368
• En el microambiente tumoral, HLA-DR presenta péptidos derivados de células tumorales apoptóticas fagocitadas o de proteínas tumorales secretadas captadas mediante macropinocitosis, vinculándolo con la vigilancia inmunitaria contra el cáncer.
  Referencias relacionadas:
  PMID:31495665
• HLA-DR también presenta péptidos procedentes de autofagolisosomas después de la macroautofagia, un proceso fundamental para la selección de células T tímicas y la tolerancia inmunitaria central.
  Referencias relacionadas:
  PMID:17182262, PMID:23783831
• La selección de epítopos inmunodominantes por parte del MHCII sigue dos vías de procesamiento distintas: «unirse primero, cortar/recortar después» para los péptidos derivados de patógenos y «cortar primero, unirse después» para los péptidos propios.
  Referencias relacionadas:
  PMID:25413013
• Un residuo de anclaje hidrofóbico grande en la posición 1 del péptido es esencial para una interacción de alta afinidad con el surco de unión del MHCII.
  Referencias relacionadas:
  PMID:8145819
• A nivel subcelular, HLA-DR se encuentra en la membrana celular, pero también circula a través del retículo endoplasmático y de los compartimentos endosómicos/lisosómicos, incluidos los endosomas tempranos y tardíos, los lisosomas y los autofagolisosomas.
• Se expresa predominantemente en células presentadoras de antígenos profesionales —macrófagos, células dendríticas y células B—, así como en células epiteliales tímicas, donde media la educación de las células T.
  Referencias relacionadas:
  PMID:15322540, PMID:23783831, PMID:31495665
• Entre sus principales características estructurales se incluyen un péptido señal, una única hélice transmembrana, enlaces disulfuro y glicosilación ligada a N; también está sujeto a ubiquitinación.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno recombinante abarca los aminoácidos 26–126 de HLA-DRA humano, cubriendo el dominio extracelular N-terminal; esta región es menos polimórfica que la cadena beta y puede conferir una amplia reactividad frente a los alelos HLA-DR, pero se recomienda la validación en el sistema celular diana.
• Para el western blot, se espera una banda de aproximadamente 29 kDa en condiciones reductoras; considere utilizar líneas celulares derivadas de CPA humanas (por ejemplo, Raji o THP-1 diferenciadas) o tejidos con una alta expresión de MHCII como controles positivos.
• En inmunofluorescencia/ICC, deben optimizarse los protocolos de fijación y permeabilización, ya que la diana está localizada en la membrana y también puede detectarse en compartimentos intracelulares (endosomas/lisosomas). Se recomienda la tinción conjunta con un marcador de membrana.
• Para ELISA, el anticuerpo puede ser adecuado como reactivo de captura o detección de HLA-DR soluble o de complejos péptido–MHC; las condiciones del ensayo deben ajustarse mediante titulación para establecer la linealidad y la especificidad.
• Tenga en cuenta que la reactividad cruzada está indicada únicamente para humanos; no se garantiza la reactividad cruzada con otras especies. Al adaptar el ensayo a muestras de primates no humanos, debe verificarse la homología de secuencia.

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